[发明专利]除草醚半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了除草醚半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用，本发明提供的除草醚半抗原既最大程度保留了除草醚的特征结构，使得除草醚半抗原的免疫原性明显增强，又具有可以与载体蛋白发生偶联的醛基；用除草醚半抗原与载体蛋白偶联后得到的除草醚人工抗原去免疫动物，更有利于刺激动物免疫应答产生特异性更强、灵敏度更高的抗体，经检测除草醚抗体的灵敏度可达0.1μg/L，与其他农药的交叉反应率低，为后续建立除草醚的各种免疫分析方法提供了基础。

技术领域

本发明属于食品安全检测领域。更具体地，本发明涉及除草醚半抗原、人工抗原和抗体及其制备方法和应用。

背景技术

除草醚(Nitrofen)是一种水旱田除草剂，在各种土质、气温条件下均可适用，主要防治某些一年生阔叶及禾本科杂草，可用于白菜、甘蓝、萝卜、油菜、芥菜、水萝卜、茎兰、菜花、芹菜、胡萝卜、香菜、茵香、葛笋、阁蒿、菠菜等以及某些豆科蔬菜等菜田。除草醚作为醚类选择性触杀型除草剂，由于对试验动物具有致畸、致突变、致癌作用，多数国家已禁止生产和使用。

目前，国内外检测除草醚主要有气相色谱法、高效液相色谱法和气相色谱质谱法等分析方法。仪器检测法存在样品前处理繁琐、检测时间长、仪器贵重等缺点，所以在我国无法得到广泛应用，并且不符合现场检测“在短时间内低成本对大量样品进行准确检测和筛选”的要求。而免疫学检测分析技术以其高灵敏、特异性高、快速、操作简便等优点在药物残留检测领域已被广泛应用，比起仪器等检验方法有很多优势。所以免疫分析为除草醚残留研究提供了一条新的分析检测方法。

在建立免疫学检测方法并应用该检测方法检测除草醚残留量时，关键技术在于能够获取到特异性强、灵敏度高的抗体，而要实现这一目标，前提条件就是得合成、制备出合适的除草醚半抗原。但是，目前，国内还没有针对除草醚半抗原的相关报道。

发明内容

针对现有技术中存在的不足之处，本发明提供一种能最大程度保留除草醚的特征结构，又具有一定长度连接臂的半抗原以及这种半抗原的制备方法；以此半抗原制备的人工抗原、检测灵敏度高和特异性强的抗体；以及此半抗原的应用。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

本发明的第一个目的是提供一种除草醚半抗原，其具有如下结构式：

本发明的第二个目的是提供一种除草醚半抗原的制备方法，其是由2,4-二氯苯酚与5-氯-2-硝基苯甲醛反应得到。

进一步地，该制备方法为：取2,4-二氯苯酚加乙腈溶解，加入强碱和无水碘化亚铜，充分搅拌后，加入5-氯-2-硝基苯甲醛，回流反应12h，反应完毕后，进行分离纯化后得到除草醚半抗原；其中，所述2,4-二氯苯酚、强碱和5-氯-2-硝基苯甲醛的物质的量之比为1:(1.0-1.5):(1.0-1.2)；所述强碱为KOH、NaOH或NaH中的任意一种。

进一步地，该制备方法的具体步骤如下：取2,4-二氯苯酚1.6g加乙腈100mL溶解，加入KOH 0.67g和无水碘化亚铜0.7g，充分搅拌后，加入5-氯-2-硝基苯甲醛1.85g，回流反应12h，反应完毕后降至室温，过滤，滤液蒸干，用60mL体积比为1:3的无水乙醚-正己烷重结晶，得到除草醚半抗原。

本发明的第三个目的是提供一种除草醚人工抗原，其是载体蛋白和上述除草醚半抗原偶联得到的偶联物。

进一步地，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、人血清白蛋白或血蓝蛋白。

本发明的第四个目的是提供一种除草醚人工抗原的制备方法，包括如下步骤：

将上述除草醚半抗原溶于有机溶剂中，即为A液；

将载体蛋白溶解在0.05mol/L的CB缓冲液中，得到B液；以及