[发明专利]一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂及其制备方法在审
| 申请号： | 201910778155.0 | 申请日： | 2019-08-22 |
| 公开（公告）号： | CN110452662A | 公开（公告）日： | 2019-11-15 |
| 发明（设计）人： | 刘凯;马超;孙静;张洪杰 | 申请（专利权）人： | 中国科学院长春应用化学研究所 |
| 主分类号： | C09J189/00 | 分类号： | C09J189/00;C09J11/06 |
| 代理公司： | 11227 北京集佳知识产权代理有限公司 | 代理人： | 付丽<国际申请>=<国际公布>=<进入国 |
| 地址： | 130022吉*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 阴离子表面活性剂 烷基 类弹性蛋白 生物医用 正电荷 制备 阴离子型表面活性剂 十二烷基苯磺酸钠 十二烷基磺酸钠 静电作用力 生物相容性 生物粘合剂 粘合剂 不同条件 动物表皮 多肽骨架 技术合成 可降解性 绿色环保 伤口修复 制备工艺 重组蛋白 胶水 止血 新一代 粘合 侧链 干样 可用 湿样 黏合 生物工程 蛋白 表现 开发 | ||
1.一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂，由带正电荷的类弹性蛋白和烷基类阴离子表面活性剂组成；
所述烷基类阴离子表面活性剂包括十二烷基苯磺酸钠和/或十二烷基磺酸钠；
所述带正电荷的类弹性蛋白按照以下步骤进行表达：
将带正电荷的类弹性蛋白ELP载体质粒转化进毕赤酵母或大肠杆菌表达菌株，挑取单克隆菌落，用LB培养液进行过夜培养；将过夜活化的表达种子液加入TB培养基，待菌液达到OD600数值为0.8时，加入诱导剂异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷并降温到30度进行过量表达；诱导12小时收集菌体，用裂解缓冲液重悬，加入蛋白酶抑制剂，DNA酶，溶菌酶，用高压破碎机破碎菌体，10000rpm转速以上离心，收集上清液，HPLC纯化，得到带正电荷的类弹性蛋白ELP；
所述带正电荷的类弹性蛋白与烷基类阴离子表面活性剂的摩尔比为1：(0.5～2)。
2.根据权利要求1所述的生物粘合剂，其特征在于，所述生物粘合剂的含水量为5～15％。
3.一种基于生物工程蛋白的生物粘合剂的制备方法，包括以下步骤：
A)将带正电荷的类弹性蛋白和烷基类阴离子表面活性剂分别溶于超纯水中，得到类弹性蛋白溶液和表面活性剂溶液；
所述烷基类阴离子表面活性剂包括十二烷基苯磺酸钠和/或十二烷基磺酸钠；
B)将所述表面活性剂溶液滴加至类弹性蛋白溶液中，混合均匀，得到粘合剂溶液；
C)将所述粘合剂溶液离心后冻干，得到生物粘合剂。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述类弹性蛋白溶液的浓度为0.1～0.5mg/μL。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述表面活性剂溶液的浓度为0.05～0.3mg/μL。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述离心的速率为15000～18000rpm；
所述离心的时间为5～20min。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述冻干的时间为5～20min。
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