[发明专利]一种数字图像比色法检测食品中亚硝酸盐的方法

权利要求书

1.一种数字图像比色法检测食品中亚硝酸盐的方法，其特征在于，其包括如下步骤：

S1、样品处理：准确称取样品加水后进行匀浆，定容，沸水浴后冷却，过滤取上清液，加亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液，摇匀离心去除脂肪，再次过滤，取滤液作为样品处理液待测；

S2、配置不同浓度的亚硝酸盐标准品，用于制备标准曲线的制作；

S3、将TMB显色剂与磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液与样品处理液混合反应后进行拍照获得样品照片；采用不同浓度的亚硝酸盐标准品与TMB显色剂与磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液反应后进行拍照获得标准品照片；

S4、将上述获得标准品照片，用图像处理软件选取RGB模式对图像读取R和B通道的数据进行数据处理，绘制标准曲线；

将样品照片的RGB模式的数据代入标准曲线中即可获得样品中亚硝酸盐的浓度；

所述TMB显色剂中乙醇的质量分数为25%，TMB浓度为500 μmol/L；所述磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液的pH值为2.2；

在步骤S3中，所述TMB显色剂与磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液与样品处理液或亚硝酸盐标准品的用量为等量，反应时间为20min以上；

在步骤S4中，所述图像处理软件为Adobe Photoshop，所述数据处理为根据强度公式计算强度I = 1- B/R，以亚硝酸盐浓度为横坐标，强度ΔI = I - I₀为纵坐标绘制标准曲线，I₀为NaNO₂浓度为0时的强度，待测样品的强度ΔI_样=I_样-I₀。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述沸水浴的时间为10~20min；所述亚铁氰化钾溶液的浓度为0.25 mol/L，所述乙酸锌溶液的浓度为1 mol/L；所述离心为5000 r/min，5 min。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述样品为5 g，加水为30 mL~50 mL、70℃~80℃；定容为50 mL~100 mL，取上清液为9 mL~15 mL，所述亚铁氰化钾溶液和乙酸锌溶液分别为150 μL~300 μL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述亚硝酸盐标准品中NaNO₂标样的浓度线性范围为10 μmol/L～440 μmol/L。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S2中，所述NaNO₂标样的浓度分别为10μmol/L、15 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L、50 μmol/L、80 μmol/L、100 μmol/L、200 μmol/L、300 μmol/L、400 μmol/L。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述拍照采用的装置为四周和顶部为反光板、底部为柔光板，顶部设有光源，以保证每次拍照时光源强度一致。