[发明专利]一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法在审
| 申请号： | 201910767207.4 | 申请日： | 2019-08-20 |
| 公开（公告）号： | CN110438204A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 李雪玲;金彩虹 | 申请（专利权）人： | 上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 上海东亚专利商标代理有限公司 31208 | 代理人： | 董梅 |
| 地址： | 201109 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 环介导等温扩增反应 碳纳米管 生物技术领域 假阳性结果 安全检测 非特异性 核酸扩增 应用食品 灵敏度 扩增 优化 检测 应用 | ||
1.一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法，其特征在于，通过向环介导等温扩增反应体系中添加碳纳米管材料来实现优化，包括如下步骤：
（1）扩增反应体系优化：将碳纳米管加入到环介导等温扩增反应体系当中，然后进行核酸扩增；
（2）核酸扩增产物检测：通过电泳检测、浊度检测或显色检测。
2.根据权利要求1所述的一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法，其特征在于，在25 µL的核酸扩增反应体系中加入碳纳米管的终浓度为0.2- 8.0 μg/L。
3.根据权利要求1或2所述的一种利用碳纳米管优化环介导等温扩增反应的方法，其特征在于，所述核酸扩增反应体系包括外引物F3和B3各0.2 μmol/L，内引物FIP和BIP各1.6 μmol/L，Bst DNA聚合酶8 U，1×聚合酶缓冲液，Mg2+ 2-9 mmol/L，dNTP1.0-1.6 mmol/L，甜菜碱0-1.5 mol/L，碳纳米管0.2- 8.0 μg/ L；其中，1× Bst DNA聚合酶反应缓冲液选用1×Thermopol反应缓冲液，包含Tris-HCl (pH 8.8) 20 mmol/L，KCl 10 mmol/L，(NH4)2SO410 mmol/L，0.1% Triton X-100，MgSO4 2 mmol/L；1× Bst DNA聚合酶反应缓冲液中的MgSO4和酶反应体系中的镁离子Mg2+做合并处理；恒温扩增反应的反应程序为①60～65℃孵育10～90 min；②80℃终止反应2~20 min。
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