[发明专利]一种具有红色荧光活性的检测蛋白的日本血吸虫抗体检测试剂盒

说明书

本发明提供一种具有红色荧光活性的检测蛋白的日本血吸虫抗体检测试剂盒，所述日本血吸虫抗体检测试剂盒中包括一种日本血吸虫抗体检测试剂条和融合蛋白C3‑RFP；进一步的，本发明的日本血吸虫抗体检测荧光试纸条中，日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）和链球菌蛋白G(SPG)蛋白分别作为检测线（T），质控线（C）的包被抗原。试纸条选用硝酸纤维素膜（CN95）作为层析材料，玻璃纤维素膜作为样品垫，与PVC底板和吸水纸等一同组装成试纸条。

技术领域

本发明涉及免疫检测领域，特别涉及一种具有红色荧光活性的检测蛋白的日本血吸虫抗体检测试剂盒。

背景技术

血吸虫病是由血吸虫引起的一种危害严重的人畜共患寄生虫病，迄今为止依然是世界范围内的公共卫生难题之一。血吸虫感染可以造成人畜发病和死亡，影响人和家畜的健康并因此造成经济上的极大损失。血吸虫病主要是引起器官的损伤和感染后导致的营养不良及并发症，有研究表明，感染血吸虫病所引起的伤残调整寿命几乎等同与艾滋病，超过疟疾和肺结核，可见血吸虫病的危害。家畜是血吸虫病的主要保虫宿主。研究显示家畜和人的感染率密切相关，牛日本血吸虫感染率偏高的地区，人的感染率也较高，所以，如果不能有效控制家畜血吸虫病流行，就不能最终在中国控制和消灭血吸虫病。

目前诊断日本血吸虫病常用的方法有病原学诊断法和免疫学诊断法，病原学诊断包括粪孵法和粪检法，其漏检率比较高,且往往要感染达到一定程度以及感染后期才有可能检出，不利于早期的诊断和治疗。免疫学诊断法包括试纸条，ELISA，IHA等，由于ELISA检测需要特殊仪器，IHA方法判断的主观性较大。试纸条作为一种简便快捷，结果直观的诊断方法，在大规模的诊断中具有极高的实用价值。

常规的血吸虫检测试纸条有胶体金免疫层析试纸条和渗滤法试纸条。试纸条自开发以来，以其检测的方便性，检测迅速性特异性强等特点，成为快速诊断血吸虫病的首选。但免疫层析试纸条只能做定性实验，检测的灵敏性有待提高，而荧光免疫层析试纸条可进行定性或半定量检测，具有更高的灵敏性。

发明内容

本发明主要解决的技术问题是提供一种快速、高灵敏的免疫检测产品及方法，实现高效、高密度的免疫检测。

为了实现上述技术方案，本发明提供一种具有红色荧光活性的检测蛋白的日本血吸虫抗体检测试剂盒。

为实现上述目的，本发明首先利用基因工程技术，克隆并高效表达重组的G蛋白与红色荧光蛋白的融合蛋白C3-RFP，所述融合蛋白C3-RFP的核苷酸序列为如SEQ ID NO.1所示；氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，并通过免疫学技术对其免疫原性及特异性进行检定。实验表明，通过该方法得到的融合蛋白C3-RFP具有良好的高灵敏性及特异性。

进而，本发明利用上述方法制备的融合蛋白C3-RFP，研制日本血吸虫抗体检测试剂盒；

所述日本血吸虫抗体检测试剂盒中包括一种日本血吸虫抗体检测试剂条和融合蛋白C3-RFP；

进一步的，本发明的日本血吸虫抗体检测荧光试纸条中，日本血吸虫虫卵可溶性抗原（SEA）和链球菌蛋白G(SPG)蛋白分别作为检测线（T），质控线（C）的包被抗原。试纸条选用硝酸纤维素膜（CN95）作为层析材料，玻璃纤维素膜作为样品垫，与PVC底板和吸水纸等一同组装成试纸条。

所述融合蛋白C3-RFP 的工作终浓度为200ng/ml。

本发明同时提供一种日本血吸虫抗体荧光检测方法，将待测样品进行梯度稀释，加入融合蛋白C3-RFP，混合后上样，紫外下检测。

本发明日本血吸虫抗体荧光检测方法具有以下优点：

(1)检测快速：10分钟出结果；

(2)特异性：仅对日本血吸虫血清标本呈阳性，而对其他病原体感染的血清标本呈阴性结果；