[发明专利]重组杆状质粒及其在表达PCV3 Cap蛋白、疫苗中的应用在审
| 申请号： | 201910763039.1 | 申请日： | 2019-08-19 |
| 公开（公告）号： | CN110438156A | 公开（公告）日： | 2019-11-12 |
| 发明（设计）人： | 金宁一;李昌;许汪;杜寿文;姜宇航;王茂鹏;田明尧;鲁会军;李霄;郝鹏飞;宋利娜 | 申请（专利权）人： | 军事科学院军事医学研究院军事兽医研究所 |
| 主分类号： | C12N15/866 | 分类号： | C12N15/866;C12N15/34 |
| 代理公司： | 北京一枝笔知识产权代理事务所(普通合伙) 11791 | 代理人： | 张庆瑞 |
| 地址： | 130000 吉林省长*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 质粒 穿梭质粒 杆状 杆状病毒表达系统 间接免疫荧光试验 疫苗 转染SF9昆虫细胞 杆状病毒载体 昆虫表达系统 生物技术领域 重组杆状病毒 脂质体转染 蛋白分子 抗原性 构建 应用 成功 | ||
1.重组质粒，其特征在于，包括2个PCV3 Cap基因和杆状病毒表达载体。
2.如权利要求1所述的重组质粒，其特征在于，所述杆状病毒表达载体为pFastBacTM。
3.如权利要求1或2所述的重组质粒的构建方法，其特征在于，获得PCV3 Cap基因，克隆至pEASY-Blunt载体上，验证正确后将目的基因分别克隆至含有双启动子的杆状病毒表达载体pFastBacTM上，获得含有2个PCV3 Cap基因的重组质粒pFBD-P2C。
4.重组杆状质粒，其特征在于，其构建方法为：将如权利要求1或2所述的重组质粒转化宿主感受态细胞，经蓝白斑筛选，获得重组杆状质粒。
5.如权利要求4所述的重组杆状质粒，其特征在于，所述宿主为大肠杆菌DH10-BacTM。
6.如权利要求1或2所述的重组质粒或如权利要求4或5所述的重组杆状质粒在表达PCV3 Cap蛋白中的应用。
7.如权利要求1或2所述的重组质粒或如权利要求4或5所述的重组杆状质粒在制备疫苗或检测试剂盒中的应用。
8.表达PCV3 Cap蛋白的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤1：获得PCV3 Cap基因，克隆至pEASY-Blunt载体上，验证正确后将目的基因分别克隆至含有双启动子的杆状病毒表达载体pFastBacTM上，获得含有2个PCV3 Cap基因的重组质粒pFBD-P2C；
步骤2：将所述重组质粒转化宿主感受态细胞，经蓝白斑筛选，获得重组杆状质粒Bacmid P2C；
步骤3：将所述重组杆状质粒Bacmid P2C利用脂质体转染至SF9细胞中进行病毒拯救，转染后72h时，收取上清病毒液，盲传三代，收取SF9细胞。
9.如权利要求8所述方法获得的PCV3 Cap蛋白。
10.疫苗或检测试剂盒，其特征在于，包括如权利要求9所述的PCV3 Cap蛋白。
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