[发明专利]富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物及其制备和分析方法

说明书

本发明公开了一种富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物及其制备和分析方法。该方法采用价格便宜的海鞘作为原料，采用一定比例水混合有机溶剂进行提取，并回收上清液中残留的缩醛磷脂类，显著增大提取效率，提高了缩醛磷脂的提取量；高效液相分析前用盐酸酸化5min来分析提取物中缩醛磷脂的含量，采用质谱分析缩醛磷脂的种类，得出本发明制备的提取物包括多种缩醛磷脂成分以及多不饱和脂肪酸DHA和EPA。采用本发明方法制备的富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物可作为原料用于营养食品、老龄化疾病防治相关的保健品和药物开发等领域。

技术领域

本发明属于食品化学和生物医药领域，具体涉及富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物及其制备和分析方法。

背景技术

缩醛磷脂是一类特殊的磷脂代表，约占细胞总磷脂的10％，它是一种含有烯醚键的甘油磷脂，如缩醛磷脂酰乙醇胺、缩醛磷脂酰胆碱、缩醛磷脂酰丝氨酸等。主要特征是在sn-1位置含有烯醚键，及在哺乳动物中通常连接着c16:0；18:0或18:1的脂肪醇，在sn-2上多是n-3和n-6的多不饱和脂肪酸。在大脑、心脏等器官中含量丰富。缩醛磷脂其大多数集中分布在生物膜“脂筏”结构中，参与细胞融合、离子转运及胆固醇的运输，同时也可以作为质膜上重要抗氧化剂，避免神经细胞的损伤。

目前很多研究的结果都显示缩醛磷脂含量的下降与许多疾病有关如：阿尔兹海默症，帕金森病，Zellweger综合症等。其中阿尔茨海默病(AD)是一种进行性神经退行性疾病，是最常见的痴呆症。进一步发现阿尔兹海默症的严重程度和缩醛磷脂的减少程度存在正相关的关系。因此开展了很多动物实验和临床实验也证实了缩醛磷脂可以提高轻度认知障碍、轻度阿尔兹海默症患者和小鼠模型的学习能力和记忆力。

海鞘(Ascidians)，属于脊索动物门(Chordates)，尾索动物亚门(Urochordata)的海鞘纲(Ascidiacea)，在天然海区附着珍珠贝笼上生长，全世界大约有1600种，主要分布在热带及亚热带海域，海鞘在我国也广泛分布，资源丰富，已记录的中国沿海海鞘种类有100余种，且有很多为我国所特有海鞘是营固着生活的动物。与陆地微生物相比，海鞘共附生真菌能够耐受海洋特有的高盐、高压、低氧、低光照等多种极端条件，因此形成了独特的代谢和生理特性，产生了不同化学结构的代谢产物，为人类提供了陆地微生物所不能提供的活性代谢产物，是动物界独一无二的。因此被称为生物学研究的后起之秀，具有良好的应用前景。

目前，其他的一些海洋生物也具有缩醛磷脂类，公开号为CN108276438A的中国发明专利中公开了海参中提取制备EPA缩醛磷脂。该发明通过磷脂酶D制备了EPA缩醛磷脂，进一步的在进行组分分离得到了缩醛磷脂酰胆碱(pPC)，缩醛磷脂酰乙醇胺(pPE)。但该发明只是单一的提取了EPA类的缩醛磷脂，并没有阐述其海参中EPA类缩醛磷脂的含量，同时也没有说明其他种类的缩醛磷脂以及分离和含量的测定。

发明内容

针对上述现有技术中存在的缺点，本发明的目的是提供一种富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物及其制备和分析方法。本发明利用海鞘来制备富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物，海鞘的脂类代谢产物种类不同于陆地生物，含有更加丰富的磷脂类化合物，可以更高效地获得缩醛磷脂类化合物。

为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种富含多种缩醛磷脂的海鞘提取物的制备方法，包括以下步骤：

(1)准备新鲜海鞘，进行预处理；预处理新鲜的真海鞘(Halocynthiaroretzi)，挤出水分、清洗海泥、去掉内脏等不可食用组织，并剪碎为均匀小块，放在-80度以下低温冷冻之后，进行研磨获得匀浆，在冷冻干燥机上制备冻干粉。为防止后续提取步骤中缩醛磷脂成分氧化失活，将海鞘冻干粉与抗氧化剂VE干粉(比例是1:1％-2％)进行均匀混合。

(2)有机溶剂提取，真空浓缩得到富含缩醛磷脂的海鞘提取物：