[发明专利]基因FOXD4在制备急性髓系白血病诊断试剂盒的应用及试剂盒

说明书

基因FOXD4在制备急性髓系白血病诊断试剂盒的应用及试剂盒，诊断试剂盒由SYBR Green聚合酶链式反应体系，用于扩增FOXD4基因和管家基因的引物对。SYBR Green聚合酶链式反应体系包括PCR缓冲液，dNTPs，SYBR Green荧光染料。本发明以FOXD4作为检测诊断的靶点应用于临床制备的诊断试剂盒，可以对急性髓系白血病患者的外周血或骨髓有核细胞进行快速诊断和预测；检测样本中目标基因FOXD4的转录水平，可以判断受试者是否患有急性髓系白血病，为癌症的早期诊断和治疗提供依据。

技术领域

本发明属于生物医药技术和血液学白血病领域，涉及核酸的检测试剂盒及其在急性髓系白血病体外诊断中的应用。

背景技术

急性髓系白血病(Acute Myeloid Leukemia，AML)是造血干细胞恶性变化所产生的高死亡率疾病之一，在全世界癌症病例中恶性程度较高。在治疗过程中，一般是放射治疗、化学药物治疗、骨髓移植等，但临床成功率、移植配型和预后方面都有一定的问题。白血病的早期诊断在疾病的治疗上十分重要，因此寻找和确定有效的生物标志甚至作为治疗靶点是迫切需要解决的问题。分子诊断技术对判断AML具有独特的客观优势，而基于Real-time PCR技术的体外检测系统使对疾病的诊断更加便利和精准。

Forkhead蛋白是一类在进化上高度保守的重要转录因子家族。Forkhead蛋白的典型结构特征是含有一段由100个氨基酸组成的进化上高度保守的Forkhead(或称为Wingedhelix)DNA结合结构域。Forkhead转录因子的主要功能包括调控与胚胎发育，细胞生长，增殖，分化，干细胞干性保持，语言形成以及长寿相关基因表达。Forkhead基因突变或调控异常导致发育缺陷以及肿瘤形成。Forkhead结构域在真核生物中十分保守，存在于从酵母到人类中，在人类基因组含有超过40种Forkhead蛋白。除了可以直接结合DNA之外，Forkhead转录因子还可以与多种信号通路中的激酶或成员有直接的相互作用，从而在信号转导与转录调控之间发挥承上启下的桥梁作用。

近期研究证明，FOXD4高表达在造血细胞系统的细胞系中，并被称为髓系因子myeloid factorα(Freyaldenhoven，B.S.，C.Fried，and K.Wielckens，FOXD4a andFOXD4b，two new winged helix transcription factors，are expressed in humanleukemia cell lines.Gene，2002.294(1-2)：p.131-140.)。在骨髓增殖性疾病病人(myeloproliferative neoplasm，MPN)的循环CD34⁺细胞和粒细胞中发现FOXD4表达失调控(Cokic，V.P.，et al.，Microarray and Proteomic Analyses of MyeloproliferativeNeoplasms with a Highlight on the mTOR Signaling Pathway.PLoS One，2015.10(8)：p.e0135463.)。并且在直肠癌病人中，最近研究表明FOXD4上调，并增强直肠癌的恶性能力和上皮-间质转化能力(Chen，C.，et al.，FOXD4 induces tumor progression incolorectal cancer by regulation of the SNAI3/CDH1 axis.Cancer Biol Ther，2018：p.1-7.)。但是目前尚无研究报道FOXD4基因家族成员在急性髓系白血病AML临床病人骨髓和外周血有核细胞中的表达情况。