[发明专利]一种香椿丛生芽诱导及增殖方法

说明书

本发明公开了一种香椿丛生芽诱导及增殖方法，以当年生未木质化枝条作外植体，置于特定的诱导培养基上，在温度25℃，湿度60％,光照强度20～60μmolm^‑2s^‑1，光诱导时间16h/d的培养条件下诱导形成愈伤组织，然后在相同的培养条件下，在特定的分化培养基上诱导形成丛生芽；当丛生芽长到3cm以上时切下，选择致密的愈伤组织继续增殖培养。采用本发明的方法，茎段的愈伤组织诱导率可达100％，丛生芽的诱导率高于50％，丛生芽增殖倍数高于8，最高可达26。

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，具体而言，涉及一种香椿丛生芽诱导及增殖方法。

背景技术

香椿是我国独有的一种材菜兼用的珍贵速生树种，在农业和林业生产中具有重要的经济价值。

在自然状态下，香椿主要靠根蘖繁殖，优点是生长迅速，并能保持母树优良性状，缺点是数量有限不能满足大面积栽培的需要。种子播种和扦插育苗繁殖也是常用的香椿繁殖方法。但是，种子繁殖其后代容易产生性状分离退化，大大降低香椿的商品价值，而扦插繁殖受材料限制，繁殖系数低、繁殖速度慢也无法满足生产需要。因此，香椿组织培养方法在近几十年里得到了广泛的应用，其能够在短时间内获得大量植株，且可以保持母树的优良性状。

随着分子生物学技术的发展，利用愈伤组织分化进行无性快繁在香椿繁殖技术领域得到初步应用。例如授权专利ZL201610947913.3和专利申请CN107006372A中均采用了愈伤组织分化进行香椿快繁，但是上述两个专利的愈伤组织诱导培养基中国均需要添加TDZ以提高形成愈伤组织的能力，但是添加TDZ明显增加了生产成本，不利于在生产实践中进行推广应用,且上述两个专利的繁殖效率较低，还需进一步提高。另外，专利ZL20161094采用种子和叶片作为外植体，材料来源易受母体年龄和大小年结实限制。康冰等在“采用香椿无性系愈伤组织诱导及植株再生”(《园艺学报》2004，第1期第15页)一文中也公开了采用愈伤组织诱导芽分化进行香椿无性繁殖的方法，但是其不定芽的增殖倍数仅为5.5，且其并未对愈伤组织多次再利用。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种一种香椿丛生芽诱导及增殖方法，包括如下步骤：

(1)选择当年生未木质化枝条作外植体；

(2)将外植体置于诱导培养基上，在温度25℃，湿度60％,光照强度20～60μmolm^-2s^-1，光诱导时间16h/d的培养条件下诱导形成愈伤组织；诱导培养基为MS培养基+0.5-1.0mg/L 6-BA+0.5mg/L；

(3)在相同的培养条件下，在分化培养基上诱导愈伤组织分化形成丛生芽；分化培养基为MS培养基+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA；

(4)切下丛生芽，选择致密的愈伤组织切下并在相同的培养条件下继续用分化培养基进行再增殖培养。

进一步的，步骤(1)包括：将采集的当年生未木质化枝条上的叶片去掉并剪为4_6cm，用洗衣粉水冲洗10min，再用流水冲洗1h，滤干；在超净工作台中，用75％酒精处理30s，无菌水洗涤3次；然后用2％次氯酸钠处理5min，无菌水洗涤3次后，吸干水，将外植体切成1cm备用。

优选的，当愈伤组织生长到约2cm*2cm时诱导分化丛生芽。

优选的，诱导培养基为MS培养基+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA。

优选的，当大部分丛生芽长到3cm以上时，切下丛生芽。

进一步的，将步骤(4)中获得的丛生芽种植于生根培养基中生根。

进一步的，重复步骤(4)再增殖培养4-5次。

本发明的有益效果包括：