[发明专利]一株产正丁酸的大肠杆菌工程菌的构建及应用

权利要求书

1.一种基因工程菌，其特征在于，是对出发菌株大肠杆菌（Escherichia coli） ATCC8739进行基因工程改造获得的菌；所述基因工程改造为不表达乙酸激酶基因ackA、乙醇脱氢酶基因adhE和乳酸脱氢酶基因ldhA，并游离过表达乙酰乙酰辅酶A硫解酶基因atoB、3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因hbd、3-羟基丁酰辅酶A脱水酶基因crt、反式烯酰辅酶A还原酶基因ter和酰基辅酶A硫酯酶II基因tesB；

所述乙酸激酶基因ackA表达的乙酸激酶的氨基酸序列如NCBI上 accession number:ACA77022.1所示；所述乙醇脱氢酶基因adhE表达的乙醇脱氢酶的氨基酸序列如NCBI上accession number: ACA78022.1所示；所述乳酸脱氢酶基因ldhA表达的乳酸脱氢酶的氨基酸序列如NCBI上 accession number: ACA77911.1所示；

所述乙酰乙酰辅酶A硫解酶基因atoB表达的乙酰乙酰辅酶A硫解酶的氨基酸序列如NCBI上accession number: P76461所示；所述3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶基因hbd表达的3-羟基丁酰辅酶A脱氢酶的氨基酸序列如NCBI上accession number: KHD37023.1所示；所述3-羟基丁酰辅酶A脱水酶基因crt表达的3-羟基丁酰辅酶A脱水酶的氨基酸序列如NCBI上accession number: NP_349318.1所示；所述反式烯酰辅酶A还原酶基因ter表达的反式烯酰辅酶A还原酶的氨基酸序列如NCBI上accession number: 4EUF_A所示；所述酰基辅酶A硫酯酶II基因tesB表达的酰基辅酶A硫酯酶II的氨基酸序列如NCBI上accession number:WP_085701399所示。

2.如权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，利用FLp/FRT系统敲除了乙酸激酶基因、乙醇脱氢酶基因和乳酸脱氢酶基因。

3.一种产丁酸的方法，其特征在于，应用权利要求1-2任一所述的基因工程菌进行发酵。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，将权利要求1-2任一所述的基因工程菌活化后，于温度35-39℃、转速700-900 rpm、通气量1-1.5 vvm和pH6.5-7.5的条件下进行发酵，发酵时间为60-90 h。

5.如权利要求3或4所述的方法，其特征在于，所述发酵使用的发酵培养基含有：甘油40-60 g/L，酵母膏 20-25 g/L，蛋白胨 10-15 g/L，KH₂PO₄ 2.0-2.5 g/L和K₂HPO₄ 12-13g/L。

6.权利要求1-2任一所述的基因工程菌在生产丁酸或生产含有丁酸的产品中的应用。