[发明专利]一种试剂盒

说明书

本发明公开了一种试剂盒，所述试剂盒用于检测miR‑200家族的SNP位点rs1045385的等位基因，其中试剂盒包括扩增引物、扩增试剂、测序试剂、预处理试剂和酶系。本发明的试剂盒中的引物及实验方法均是经过精密的设计和测试得出的，适用于各种样本的miR200家族的SNP位点检测，并且检测效率高，检测结果准确。直接使用本发明中的扩增检测试剂盒和检测方法，对实验员的操作要求低，对检测环境的耐受力强，可以随时快速地进行扩增检测工作，方便快捷，检测成本低，结果准确且得出时间短，可以最大程度地减轻被检者的负担，具有良好的市场潜在价值。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，属于生物检测领域。

背景技术

AP-2α是转录因子家族的成员之一，通过调控细胞增殖和凋亡过程中的多种基因起到肿瘤抑制的作用。已有研究表明：包括顺铂在内的多种化疗药物可诱导内源性AP-2α的表达，从而促进癌细胞凋亡、增强细胞对化疗药物的敏感性。与此相反，microRNA-200(miR-200)家族(包括miR-200b、miR-200c和miR-429)在子宫内膜癌与食道癌中高表达，而它们的过度表达与细胞对顺铂的抗性相关。通过生物信息学软件Target Scan、Microcosm和miRanda来预测AP-2α基因上的miRNA结合位点，发现在基因的3’端非翻译区(UTR)有一个miR-200b、miR-200c和miR-429共有的应答元件(MRE)，而且在这个应答元件中具有一个单核苷酸多态性位点(SNP)rs1045385。通过验证实验说明过表达miR-200b、miR-200c和miR-429都降低了MRE以及包含有MRE的野生型3’UTR的荧光素酶表达，而缺失了MRE的3’UTR的荧光素酶活性不受影响。这些结果表明miR-200b、miR-200c和miR-429确实能结合到AP-2α基因3’UTR的MRE上，且miR-200b、miR-200c和miR-429都能负调控细胞内源性的AP-2α的表达。SNP rs1045385的等为位点C替换为A后会抑制miR-200b、miR-200c和miR-429结合到3’UTR上，Western结果分析也表明AP-2α的3’UTR中rs1045385位点A改变为C后，干扰了miR-200b、miR-200c和miR-429与基因3’UTR的结合，导致AP-2α的表达上调。因此，miR-200b、miR-200c和miR-429在子宫内癌细胞中通过抑制AP-2α的表达来降低细胞对顺铂的敏感性，且SNPrs1045385通过影响miR-200b、miR-200c和miR-429与AP-2αmRNA的结合，影响细胞对顺铂的敏感性，说明SNP位点rs1045385是顺铂治疗的预后标志。但由于该位点目前无试剂盒进行检测，无法快速为临床提供依据。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种试剂盒。

为实现上述发明目的之一，本发明采用的试剂盒的技术方案如下：

本发明的所述试剂盒用于检测miR-200家族的SNP位点rs1045385的等位基因，其中试剂盒包括扩增引物、扩增试剂、测序试剂、预处理试剂和酶系。

优选的，所述酶系包括DNA聚合酶。

优选的，所述扩增试剂包括扩增缓冲液、dNTPs和Mg²⁺。

优选的，所述预处理试剂包括全血样品PCR的缓冲液。

优选的，所述预处理试剂含有100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，pH 9.3～9.5。

优选的，所述扩增引物的上游引物如序列表SEQ ID NO：1所示。

优选的，所述扩增引物的下游引物如序列表SEQ ID NO：2所示。

具体的，上游引物Forward：5'GCCAAAAGATGATGACAA 3'；