[发明专利]一种基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法

权利要求书

1.一种基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法，其特征在于，所述基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法包括以下步骤：

第一步，鲫鱼fst基因克隆，提取鲫鱼肌肉组织总RNA、反转录为cDNA、以cDNA为模板；经过PCR扩增后获得序列；

第二步，转基因载体的构建，通过BamHI和Xmal酶切，目的基因片段插入其中，形成转基因载体，含有主要的元件为Tol2-mylz2-fst-rabbit globin-Tol2，mylz2启动子使目的基因在肌肉组织特异表达，rabbit globin可增加目的基因mRNA的稳定性；

第三步，显微注射获得转基因鱼。

2.如权利要求1所述的基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法，其特征在于，所述基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法鲫鱼fst基因克隆引物如下：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2。

3.如权利要求1所述的基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法，其特征在于，所述基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法经过PCR扩增后获得序列SEQ ID NO：3。

4.如权利要求1所述的基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法，其特征在于，所述显微注射获得转基因鱼方法包括：

(1)在显微注射前，进行转基因载体处理，其包括去毒性处理和防串联处理；

(2)体外合成Tol2转座酶mRNA；

(3)对鲫鱼胚胎显微注射所述转基因载体处理后的质粒DNA和所述Tol2转座酶mRNA；

(4)将显微注射后的鲫鱼胚胎作为P0代，所述P0代养殖性成熟后，通过与野生雌鱼测交得到后代F1代，将所述F1代阳性个体饲养至性成熟后采用自交获得纯合F2代。

5.如权利要求4所述的基于转基因增加鲫鱼生长速度的方法，其特征在于，所述体外合成Tol2转座酶mRNA具体包括：

首先，将带有转座酶基因的396载体，用NotⅠ限制性内切酶线性化，然后用SP6体外转录试剂盒进行体外转录；

其次，进行DNA模板的去除及反应终止；

最后，纯化。