[发明专利]乌药醚内酯用于制备外周血单个核细胞冻存保护剂的用途

说明书

本发明公开了乌药醚内酯用于制备外周血单个核细胞冻存保护剂的用途。冻存密度过高会明显降低PBMC细胞的冻存复苏率以及复苏后向CIK细胞诱导培养的扩增效率，一定程度影响了PBMC的复苏应用，而在冻存保护剂中添加适量乌药醚内酯可以支撑PBMC的高密度冻存，在冻存密度为常规冻存密度10倍的情况下，冻存复苏率以及复苏后向CIK细胞诱导培养的扩增效率不仅没有降低，还有较为明显的提高，这表明乌药醚内酯可以用于制备外周血单个核细胞高密度冻存保护剂，可以在不降低冻存效果的前提下降低冻存成本。

技术领域

本发明属于免疫细胞领域，涉及外周血单个核细胞的冻存，具体涉及乌药醚内酯用于制备外周血单个核细胞高密度冻存保护剂的用途。

背景技术

外周血单个核细胞(PBMC)是外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞、单核细胞、吞噬细胞和树突状细胞等。PBMC常用于自身免疫疾病、恶性肿瘤、器官移植和药物敏感试验等领域的研究，应用越来越成熟。

PBMC研究和应用过程中绕不开冻存步骤。冻存密度对细胞冻存复苏后的活性具有重要影响。目前，PBMC的冻存密度常选择1×10⁷/mL。

但是，目前的冻存密度导致PBMC的冻存成本较高，但是，如果提高冻存密度，其复苏后的细胞活性又会有明显降低。

因此，需要寻找能够支持PBMC高密度冻存的保护剂。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供乌药醚内酯用于制备外周血单个核细胞高密度冻存保护剂的用途，以在不降低冻存效果的前提下降低冻存成本。

本发明目的通过以下方案实现：

乌药醚内酯用于制备外周血单个核细胞冻存保护剂的用途。

乌药醚内酯用于制备外周血单个核细胞高密度冻存保护剂的用途。

一种外周血单个核细胞的冻存保护剂，含有适量的乌药醚内酯。

一种外周血单个核细胞的高密度冻存保护剂，含有适量的乌药醚内酯。

有益效果：

冻存密度过高会明显降低PBMC细胞的冻存复苏率以及复苏后向CIK细胞诱导培养的扩增效率，一定程度影响了PBMC的复苏应用，而在冻存保护剂中添加适量乌药醚内酯可以支撑PBMC的高密度冻存，在冻存密度为常规冻存密度10倍的情况下，冻存复苏率以及复苏后向CIK细胞诱导培养的扩增效率不仅没有降低，还有较为明显的提高，这表明乌药醚内酯可以用于制备外周血单个核细胞高密度冻存保护剂，可以在不降低冻存效果的前提下降低冻存成本。

附图说明

图1为细胞存活率测定结果；

图2为CD3⁺CD56⁺细胞比例测定结果；

图3为CIK细胞对肿瘤杀伤活性测定结果。

具体实施方式

一、实验材料

外周血采集自健康志愿者，签署知情同意书仅用于科学研究。采集后两小时内提取人外周血淋巴细胞，并分离血浆作为自体血浆用于细胞冻存。

人外周血淋巴细胞分离液为Solarbio。

乌药醚内酯购于成都普瑞法，纯度≥95％。

程序降温盒购自上海易英生物科技有限公司。

GT-T551无血清培养基为TAKARA公司产品，低糖DMEM培养基为GIBCO产品。

人AB血清为上海梦泽生物科技有限公司产品，胎牛血清为GIBCO产品。