[发明专利]一种捕获核酸分子的方法及其应用

权利要求书

1.一种捕获核酸分子的方法，其特征在于，所述核酸分子包括互补的第一核酸链和第二核酸链，所述核酸分子具有至少一个单链末端，至少一个所述单链末端位于所述第一核酸链上，该方法包括：

利用探针捕获所述核酸分子，使所述探针和所述第一核酸链上的至少一部分互补结合，以获得杂交复合体，所述第一核酸链上的至少一部分包含所述单链末端。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述单链末端位于所述第一核酸链的3’端；

任选地，所述探针为寡核苷酸单链；

任选地，所述探针的长度为20～80nt；

任选地，所述探针的3’末端的核苷酸含有羟基；

任选地，所述探针固定在固体介质上，所述固体介质选自玻璃、塑料和磁珠中的至少一种。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述核酸分子通过连接第一核酸片段和第二核酸片段而获得，所述第一核酸片段和所述第二核酸片段均为双链DNA，所述第一核酸片段为已知序列，所述第一核酸片段包括互补的第一链和第二链，所述单链末端位于所述第一链上；

任选地，所述第一核酸片段和所述第二核酸片段通过平末端连接和/或粘性末端连接以获得所述核酸分子；

任选地，所述第一链的5'端具有磷酸基团；

任选地，所述第二链的3’端无羟基。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，80℃≥(Tm1-Tm2)≥10℃并且90℃≥Tm1≥50℃，Tm1为所述第一链的溶解温度，Tm2为所述第二链的溶解温度；

任选地，所述第一链的所有序列与探针互补配对；

任选地，所述Tm1为71℃，Tm2＝45.6℃；

任选地，Tm2-5℃≤T≤Tm1-5℃，T为进行所述捕获的温度；

任选地，所述第一链的3’端带有光学可检测标记；任选地，所述光学可检测标记为荧光分子。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述方法还包括在进行所述捕获之前，使所述核酸分子解链为单链核酸分子。

6.一种杂交复合体，其特征在于，所述的杂交复合体通过权利要求1-5任一所述的方法获得。

7.一种试剂盒，包括权利要求1-5任一所述的核酸分子。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含所述探针；

任选地，所述试剂盒还包括所述杂交复合体。

9.权利要求7或8所述的试剂盒在序列杂交捕获和/或测序中的用途。

10.一种测序方法，其特征在于，包括对杂交复合体进行序列测定，所述杂交复合体利用权利要求1-5任一所述的方法获得。