[发明专利]一种抗错配修复蛋白MLH1单克隆抗体及其免疫检测应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，公开了一种杂交瘤细胞株OTI4H4(保藏编号为CGMCC No.18199)分泌的抗错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体。本发明还涉及OTI4H4分泌的单克隆抗体在制备用于检测错配修复蛋白MLH1的免疫检测工具中的应用，包含免疫组织化学检测试剂盒与标记肿瘤试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与错配修复蛋白MLH1特异性结合，显著提高了错配修复蛋白MLH1免疫检测的特异性和可靠性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种杂交瘤细胞株OTI4H4分泌的单克隆抗体与错配修复蛋白MLH1特异性结合用于免疫检测的方法和应用。

背景技术

错配修复系统(mismatch repair，MMR)是细胞内基因组准确复制和稳定的基本保证。MMR蛋白在修复机制中发挥着重要作用,可识别DNA复制过程中出现的错配碱基,并进行水解和修复,从而维持遗传物质的稳定性。但是，MMR基因突变或启动子甲基化使机体细胞错配修复功能缺失，引起基因组的不稳定可导致肿瘤的发生。

MutL同系物1(mutL homolog1，MLHl)是错配修复基因家族中的重要成员之一，其在保持遗传信息的完整性，避免遗传突变的产生具有重要的作用。MLHl基因定位于3p21.3，是DNA错配修复的高密度分布区，启动区甲基化引起MLHl基因表达的沉默，从而导致了错配修复功能的失活。研究显示，MLHl在多种肿瘤组织中均有表达，其的功能缺陷被认为是肿瘤发病的重要机制，已成为近年来研究的热点。MLHl基因启动子发生高甲基化时，其表达水平降低并使DNA碱基错配修复功能下降，导致在DNA复制过程中发生错误，最终诱发肿瘤。MLHl蛋白缺失导致肿瘤细胞难以应对DNA损伤时对肿瘤细胞自身的影响，由于MMR系统功能缺失导致的肿瘤往往恶性程度较低。

目前临床上主要通过免疫组织化学(简称免疫组化，Immunohistochemistry，IHC)病理实验检测肿瘤组织中错配修复蛋白MLH1的表达状况，其性能的优劣直接决定着整个检测的灵敏度和特异性。因此，研制出一种结合特异性较高的针对错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种与错配修复蛋白MLH1特异性结合的单克隆抗体，及其在制备用于检测错配修复蛋白MLH1的免疫检测工具中的应用。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种能分泌抗GPA33蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株OTI4H4，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称为CGMCC)，保藏日期为2019年7月11日，保藏编号为CGMCC No.18199。

本发明还提供了一种特异性结合错配修复蛋白MLH1的单克隆抗体，由上述杂交瘤细胞株OTI4H4分泌。

本发明所述单克隆抗体制备方法如下：

(1)重组表达载体的构建：基因合成MLH1核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，ORF长度为660bp，相对应的错配修复蛋白MLH1包括第339-558氨基酸序列，如SEQ ID No.2所示，氨基酸长度为220aa。将合成的错配修复蛋白MLH1的ORF插入表达载体pET23a-His(购于Origene公司)，构建错配修复蛋白MLH1的重组表达质粒pET23a-His-rMLH1。

(2)重组错配修复蛋白MLH1的表达与纯化：将构建的错配修复蛋白MLH1重组表达质粒转化E.coli细胞，裂解离心获得可溶性蛋白，经镍柱亲和层析柱纯化，获得纯化的重组错配修复蛋白MLH1。