[发明专利]一种用于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养基及其应用

权利要求书

1.一种用于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养基，其特征在于，由以下重量计的：乳糖12.0～18.0g、牛肉膏8.0～12.0g、MgSO₄·7H₂O 0.8～1.2g、Na₂HPO₄ 0.2～0.8g、MnCl₂ 0.8～1.2g和水苏糖0.6～1.0g制成，将各组分用蒸馏水溶解，混匀，用盐酸或氢氧化钠调节pH为7.1～7.5，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌25分钟，冷却即成；

所述的丝状真菌为生物安全性优良的黑曲霉、米曲霉(Aspergillus oryzae)As3.951，宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)As3.758，泡盛曲霉(Aspergillus awamori)As3.350和甘薯曲霉(Aspergillus awamori)As3.324。

2.根据权利要求1所述的用于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养基，其特征在于，所述的培养基是以下重量计的：乳糖12.0g，牛肉膏8.0g，MgSO₄·7H₂O 0.8g，Na₂HPO₄0.2g，MnCl₂ 0.8g和水苏糖0.6g制成，将各组分用蒸馏水溶解，混匀，用盐酸或氢氧化钠调节pH为7.2，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌25分钟，冷却即成。

3.根据权利要求1所述的用于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养基，其特征在于，所述的培养基是以下重量计的：乳糖18.0g，牛肉膏12.0g，MgSO₄·7H₂O 1.2g，Na₂HPO₄0.8g，MnCl₂ 1.2g和水苏糖1.0g制成，将各组分用蒸馏水溶解，混匀，用盐酸或氢氧化钠调节pH为7.3，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌25分钟，冷却即成。

4.根据权利要求1所述的用于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养基，其特征在于，所述的培养基是以下重量计的：乳糖15.0g，牛肉膏10.0g，MgSO₄·7H₂O 1.0g，Na₂HPO₄0.5g，MnCl₂ 1.0g和水苏糖0.8g制成，将各组分用蒸馏水溶解，混匀，用盐酸或氢氧化钠调节pH为7.4，加蒸馏水至1000mL，121℃灭菌25分钟，冷却即成。

5.权利要求1-4所述的用于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶培养基的应用方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)菌种活化：将丝状真菌菌种接种于斜面保藏培养基斜面上，28～30℃培养72h，菌落孢子布满整个斜面，即为活化菌种；所述斜面保藏培养基是：取洗净去皮、挖去芽眼的马铃薯200g，切成片状或丝状，加入10g玉米粉，再加水至1000mL混匀，煮沸15min，用纱布过滤，加20g琼脂、20g葡萄糖，再加热使其溶化，补水至体积为1000mL，121℃灭菌25分钟，冷却即成；

(2)种子培养：将上述丝状真菌活化菌种按照重量计0.3％接种量接种于种子培养基中，30℃、180r/min摇床震荡培养20h，得到种子液；所述种子培养基：取洗净去皮、挖去芽眼的马铃薯180g，切成片状或丝状，加水1000mL，煮沸15min，用纱布过滤，加20g葡萄糖和玉米淀粉5g，再加热使其溶化混合均匀，补水至体积为1000mL，121℃灭菌25分钟，冷却即成；

(3)发酵培养：将上述种子液以重量计5％接种于丝状真菌液体发酵产α-半乳糖苷酶的培养基中，30℃、200r/min摇床震荡培养35h，得到发酵酶液，发酵酶液于4℃、10000r/min离心10min，收集上清液，即为α-半乳糖苷酶，测酶活性；

所述的α-半乳糖苷酶测酶活性是：α-半乳糖苷酶的活力单位：在37℃，pH5.0条件下，1min分解底物对硝基酚-α-D-吡喃半乳糖苷生成1μmol对硝基苯酚所需的酶量为1个酶活力单位，计算公式是：

计算公式：α-半乳糖苷酶酶活力

式中：A_x样品酶液吸光度OD值；A₀空白吸光度OD值；K对硝基酚标准曲线的斜率；C₀对硝基酚标准曲线的截距；D_f稀释倍数；v吸取样品酶液体积/mL；t反应时间/min。