[发明专利]鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的特异性引物，包括用于检测鸡新型环状病毒的检测引物GyV3‑1/GyV3‑2，和用于检测鸡传染性贫血病毒的检测引物CIAV‑5/CIAV‑6；其核苷酸序列如SEQ ID NO.1‑4所示。一种鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒，包括上述用特异性引物，以及阳性质粒。一种鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的方法：提取待测样品的基因组DNA，利用特异性引物进行扩增，对扩增产物进行电泳并观察有无扩增条带，从而作出判断。本发明对两种病毒DNA的最低检出量均低于100拷贝，且对其他常见鸡源病毒均检不出，具有敏感性高、特异性好等优点。

技术领域

本发明涉及一种鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒及其应用，属于生物检测技术领域。

背景技术

鸡传染性腺胃炎(Transmissible viral proventriculitis，TVP)是由病原引起的、导致腺胃病变的一种传染病，以粪便过料、生长不良、极度消瘦为主要临床症状，以腺胃肿大如球、腺胃壁增厚、腺胃黏膜出血或溃疡为主要剖检病变。该病是我国肉鸡生产中常见疾病，严重影响肉鸡的生产性能，每年都给我国的养鸡业造成了极大的经济损失。

鸡新型环状病毒(Gyrovirus 3,GyV3)是近几年新发现的能引起鸡腺胃炎的病原；鸡传染性贫血病毒(Chicken Infectious Anemia Virus,CIAV)除了能引起鸡再生障碍性贫血外，也是鸡腺胃炎的病原之一。这两种病毒在基因结构上十分相似，均是单链环状DNA病毒，也是目前已知仅有的两种能引起鸡发病的圆环病毒，而且它们都是鸡传染性腺胃炎的致病病原，因此生产中迫切需要一种快速鉴别这两种病原的方法，以提高疾病治疗的针对性。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供了一种鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒,以快速鉴别这两种能引起鸡腺胃炎的病原。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种用于鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的特异性引物，包括用于检测鸡新型环状病毒的检测引物GyV3-1/GyV3-2，和用于检测鸡传染性贫血病毒的检测引物CIAV-5/CIAV-6；所述检测引物GyV3-1/GyV3-2的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，其扩增片段大小为337bp；

GyV3-1：5'-CTGGTCGTGCGTGGAAA-3'(SEQ ID NO.1)；

GyV3-2：5'-GGTATGAATACGAGCCCTTG-3'(SEQ ID NO.2)。

所述检测引物CIAV-5/CIAV-6的核苷酸序列如下所示，如SEQ ID NO.3和SEQ IDNO.4所示，其扩增片段大小为665bp；

CIAV-5：5'-CGCTGGAATTACAATCACTC-3'(SEQ ID NO.3)；

CIAV-6：5'-GTCCGCAATCAACTCACC-3'(SEQ ID NO.4)。

上述引物在制备鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒中的应用。

一种鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒鉴别诊断试剂盒，包括上述用于鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的特异性引物，以及阳性质粒，还包括PCR反应所必需的试剂；所述阳性质粒为重组质粒T-GyV3和T-CIAV。

进一步地，所述试剂盒以100次用量计，包括如下组分：PCR反应液4800μL，阳性质粒200μL；所述PCR反应液中含有上述用于鉴别鸡新型环状病毒与鸡传染性贫血病毒的特异性引物；所述阳性质粒为终浓度均为0.1ng/μL的重组质粒T-GyV3和T-CIAV的混合物。

进一步地，所述PCR反应液体系由如下组分组成：