[发明专利]一种提取分离紫草根有效成分的方法及其提取物在制备抑制结肠癌细胞生长药物中的应用

说明书

本发明公开了一种提取分离紫草根有效成分的方法及其提取物在制备抑制结肠癌细胞生长药物中的应用，利用高纯度的乙醇对紫草根进行提取获得粗提取物；将粗提取物稀释后通过石油醚，乙酯和正丁醇萃取获得浓缩产物；该浓缩产物经正己醇‑氯仿‑甲醇洗脱经大孔吸附树脂进行分离，获得5种有效提取成分；5种有效成分中含有脱氧紫草素，β,β‑二甲基丙烯酰阿卡宁，乙酰紫草素，β‑乙酰氧基异戊酰阿卡宁和紫草醌等成分。本发明通过细胞增殖实验，验证了脱氧紫草素，β,β‑二甲基丙烯酰阿卡宁，乙酰紫草素，β‑乙酰氧基异戊酰阿卡宁和紫草醌在人源结直肠癌细胞系中的抑制效果，本发明提供的提取方法操作简单，条件温和，成本较低，且提取效率高。

技术领域

本发明属于天然药物化学领域，具体涉及一种通过两步层析法提取分离紫草根中有效成分的方法及其提取物制备抑制结肠癌细胞生长药物中的应用。

背景技术

紫草属于紫草科多年生草本植物，此草花紫根紫，可以染紫，又名山紫草、紫芙、藐、地血、鸦衔草、紫草根，主要分布于美国、东南部沿海地区、中美、欧洲及温带地区、太平洋及印度洋岛屿。中国地区也有紫草产地分布于辽宁、山西、湖南、甘肃、山东、湖北、广西、四川、陕西、贵州、江西、河北、河南等地以及日本、朝鲜，生长于海拔50米至2,500米的地区，多生长在山坡草地，目前已经开始人工引种栽培，是中草药的一种，春秋挖根，除去残茎及泥土(勿用水洗，以防退色)，晒干或微火烘干，生用，具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗肿瘤等作用。

紫草的根和花均含色素，乙酰紫草醌、紫草烷、异丁酰紫草醌等。紫草根为清热凉血类中药，性寒，味甘，咸，能清热凉血，化斑解毒，活血透疹，常用于血热毒盛，发斑发疹等。现代医学认为紫草根由解热，抗病毒，抗过敏和抗癌等作用。

据报道紫草根对绒毛膜上皮癌及恶性葡萄胎有一定的疗效，此外紫草根对急性淋巴细胞性白血病有轻度的抑制作用。乙酰紫草素作为紫草的主要成分，是由新疆紫草细胞大规模培养技术生产的萘醌类色素化合物，具有抗癌活性。有研究表明乙酰紫草素可通过诱导细胞的JNK以及p38的磷酸化诱导细胞凋亡，进而抑制口腔细胞鳞状癌的发生发展。

癌症已成为中国首位死亡原因，是严重的公共卫生问题。据统计结果显示，中国结肠癌是最常见的癌症类型，也是最多见的癌症死亡原因。癌症是由环境、饮食以及生活方式与遗传因素协同作用的结果，由致癌物作用结合细胞遗传因素导致细胞遗传基因突变而逐渐发展为癌。癌症早期的临床症状不明显，当临床症状较为突出时，患者的病情已经处于中期或者晚期，所以选择安全有效的预防和治疗癌症的方法对于改善患者的预后及生活质量都具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提取分离紫草根有效成分的方法及其提取物在制备抑制结肠癌细胞生长药物中的应用。

基于上述目的，本发明采取如下技术方案：

一种提取分离紫草根有效成分的方法，包括如下步骤：

(1)使用乙醇对紫草根原料回流提取获得紫草根的提取液，将所得提取液进行浓缩获得粗提取物；

(2)将步骤(1)所得粗提取物用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，获得有效成分；

(3)将步骤(2)所得的有效成分通过孔径为200-300nm大孔吸附树脂柱进行分离，洗脱液为正己烷-氯仿-甲醇三者混合溶液，正己烷、氯仿和甲醇体积比例为25:6:1，利用薄层色谱进行鉴定，合并收集同一种成分的洗脱液并进行浓缩，获得7种提取成分，成分1，2，3，4和5为有效成分的粗品，成分6和7中是紫草根中的植物残渣，优选地，大孔吸附树脂柱直径为5cm，高度为20cm，正己烷-氯仿-甲醇三者混合液用量为4L，提取物1，2，3，4和5的质量分别为2.856g，12.56g，42.34g，18.37g，19.25g和4.765g，成分6和7中主要是紫草根中的植物残渣，化合物含量较低。