[发明专利]一种肉类食品中N-亚硝胺类化合物的检测方法

权利要求书

1.一种肉类食品中N-亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述N-亚硝胺类化合物包括N-二甲基亚硝胺、N-甲基乙基亚硝胺、N-二乙基亚硝胺、N-二丙基亚硝胺、N-二丁基亚硝胺、N-亚硝基哌啶、N-亚硝基吡咯烷、N-二苯基亚硝胺和N-亚硝基吗啉；所述检测方法包括超声提取、样品处理、液相色谱-三重四级杆串联质谱分析检测(LC-MS/MS)和定性及定量分析，具体步骤如下：

步骤1：超声提取：将待测食品样品粉碎，分别称取两份20-25g，然后各加入50mL二氯甲烷，超声提取20-30min，过滤后收集滤液，用二氯甲烷重新定容至50mL；

步骤2：样品处理：样品处理采用在线固相萃取/凝胶净化/定量浓缩多联机系统，所用模式为定量浓缩-凝胶净化-定量浓缩，具体包括如下步骤：

步骤a.浓缩：将步骤1定容后的滤液进行浓缩，进样体积30mL,水加热温度36℃，锥底部温度38℃，两步浓缩至终体积6mL；

步骤b.凝胶净化:将步骤a获得的浓缩液在线进行凝胶净化，其中，凝胶净化色谱条件为：凝胶渗透色谱柱:32cm×2.5cm，凝胶填料Bio Beads S-X3，200-400目；流动相:二氯甲烷；流速:5.0mL/min；进样量:5.0mL；紫外检测波长:254nm；弃去前16min色谱流出液，收集17-47min流分，淋洗3min；

步骤c.浓缩及溶剂置换：将步骤b收集的流分通过在线浓缩装置浓缩至1mL,温度参数为：水加热温度36℃，锥底部温度38℃；加入15-20mL乙腈，再次浓缩至1mL,温度参数为：水加热温度50℃，锥底部温度52℃；继续加入4-9mL乙腈或超纯水，乙腈适用于N-二苯基亚硝胺的检测分析，超纯水适用于除N-二苯基亚硝胺之外其余8种亚硝胺类化合物的检测分析，具体体积记为V,获得待测溶液；

步骤3：LC-MS/MS分析：将步骤2得到的待测溶液经0.22μm滤膜过滤后利用液相色谱-三重四级杆串联质谱联用仪进行检测，色谱条件：色谱柱型号为Acclaim^TMPolar AdvantageC16，2.1mm×150mm×3μm；流速：0.2mL/min；柱温箱30℃；进样量20μL；流动相A为0.1％甲酸水溶液，B为乙腈；梯度洗脱程序:0～1min，10％B；1～10min，10％～100％B；10～15min，100％B；15.1～20min，10％B；质谱条件：离子源：电喷雾电离源；扫描模式：正离子；扫描方式：选择反应监测，各化合物监测离子参数包括母离子、子离子、保留时间、锥孔电压、碰撞能量；喷雾电压：4200V，鞘气压力：35psi，辅助气流速：8L/h，离子传输毛细管温度：350℃；

步骤4：定性及定量分析：通过分析比较N-亚硝胺类化合物标准溶液各组分与待测溶液所得结果的保留时间及相应化合物子离子丰度比进行定性，通过分析不同浓度N-亚硝胺类化合物工作标准溶液，获取相应的标准曲线，求得食品样品进样液中相应的N-亚硝胺类化合物浓度c以及空白对照中N-亚硝胺类化合物浓度c₀，则食品样品中N-亚硝胺类化合物的含量由下式计算：

w＝2(1+V)(c-c₀)/m

其中，N-亚硝胺类化合物的含量w的单位为μg/kg；N-亚硝胺类化合物浓度c的单位为μg/L；空白对照中N-亚硝胺类化合物浓度c₀；m为所称取样品质量，g；V为所加入乙腈或水的体积。

2.根据权利要求1所述的肉类食品中N-亚硝胺类化合物的检测方法，其特征在于：所述N-亚硝胺类化合物包括N-二甲基亚硝胺、N-甲基乙基亚硝胺、N-二乙基亚硝胺、N-二丙基亚硝胺、N-二丁基亚硝胺、N-亚硝基哌啶、N-亚硝基吡咯烷、N-二苯基亚硝胺和N-亚硝基吗啉；各化合物监测离子参数包括母离子、子离子、驻留时间、锥孔电压、碰撞能量，具体见下表：

N-亚硝胺类化合物选择反应监测(SRM)参数

*为定量离子。