[发明专利]替加环素耐药基因家族tetX多重PCR检测试剂盒

说明书

本发明提供一种替加环素耐药基因家族tetX多重PCR检测试剂盒，由快速PCR混合液，超纯水，引物探针混合液，标准品，阴性对照品组成，引物探针混合液包括tetX1、tetX2、tetX3、tetX4、tetX5等引物对。本发明利用多重PCR的试验手段，建立了一套灵敏、高效的PCR检测方法，可对的含有tetX1、tetX2、tetX3、tetX4、tetX5基因的菌株进行快速、有效检测。具有成本低、效率高、操作方便、准确率高、能源消耗少、环境污染少等优点。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及一类新型替加环素耐药基因家族tetX多重PCR检测试剂盒。

背景技术

四环素类抗生素(TCs)是一类广谱抗生素，对革兰氏阳性、阴性菌、衣原体、支原体和恶性疟原虫等均有较好的抑菌作用，被广泛应用于人和家畜的细菌感染预防及治疗，并且因低剂量四环素对动物的生长具有促进作用也大量用于农业及水产养殖业。四环素类抗生素的大量使用和排放促进了四环素抗性菌和抗性基因(tetracycline resistancegenes,TRGs)的发展。目前已报道的TRGs有44种，根据作用机理主要分为3类:外排泵基因、核糖体保护基因和酶修饰基因。

替加环素(Tigecycline)是惠氏公司研发的第三代四环素，它专门针对外排泵和核糖体保护抗性机制设计，可克服外排泵和核糖体保护机制介导的四环素抗性，对多种多重耐药菌如耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MRSA)和携带新德里金属β-内酰胺酶1基因(NDM-1)的“超级细菌”肠杆菌均具有良好抑制效果，被誉为治疗由多重耐药的革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌引起的复杂感染的最后一种抗生素之一。但含有tetX基因的宿主菌对其仍具有抗性。tetX基因可编码一个含有388个氨基酸、分子量为43.7kDa的蛋白(TetX)，其氨基端氨基酸序列与许多依赖NAD(P)的氧化还原酶相似，可对四环素进行化学修饰使其失活。

2007年之前tetX基因仅发现存在于专性厌氧的拟杆菌属(Bacteroides spp.)中。2007年Ghosh和LaPara在粪肥改良过的土壤中分离出一株含有tetX的鞘氨醇杆菌Sphingobacterium sp.strain PM2P1-29，这是首次在好氧菌中发现tetX基因。除了上述两种菌属外，已知的tetX宿主菌还包括肠杆菌科(Enterobacteriaceae)中的阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、大肠杆菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯菌(Klebsiellapneumoniae)，丛毛单胞菌科(Comamonadaceae)中的睾丸酮丛毛单胞菌(Comamonastestosteroni)和食酸戴尔福特菌(Delftia acidovorans)及部分假单胞菌(Pseudomonadaceae)。目前，已在禽畜粪便、农田土壤、空气气溶胶、河水、池塘、港湾沉积物、污水厂进出水、活性污泥及剩余污泥等环境介质中检测到tetX基因。