[发明专利]一种检测微粒促凝活性的实验方法

说明书

本发明涉及一种检测微粒促凝活性的实验方法，包括血浆标本的制备：取新鲜枸橼酸盐抗凝全血2ml，通过梯度离心的方法，得到无细胞血浆标本，吸取离心后的血浆上清备用；微粒促凝活性检测实验：取一定量的无细胞血浆标本和Casupgt;2+/supgt;混匀，放入凝血功能仪上检测，通过凝血功能仪中探针的振动感受血液粘稠度的改变，记录粘稠度改变时间。这一过程所用时间，可以反映人血浆促凝活性状态，凝固时间(纤维蛋白形成时间)的长短与组织细胞急性损伤等病理状态下细胞产生微粒的水平及其促凝功能相关，进而反映人体病理状态下的高凝状态和严重程度，此方法重复性好、灵敏度高、操作简便。

技术领域

本发明属于医疗技术实验技术领域，尤其涉及一种检测微粒促凝活性的实验方法。

背景技术

微粒是人体细胞在生理或病理过程中代谢、释放到外周血中的一种囊泡(MVs)，直径在100～1000nm之间，主要由磷脂双分子层和膜包裹的内容物构成，在不同病生理状态下可发挥不同生物学效应。此外，前期研究还证实：(1)某些疾病发生时，血浆中Annexin-V(+)微粒的数量会呈现规律性升高；(2)由于Annexin-V(+)微粒表面富含带负电荷的磷酯酰丝氨酸(phosphatidylserine PS)，因此具有较强的促凝活性；(3)血小板在病理状态下产生的微粒也有极强的促凝作用；(4)可能还有一些未知的促凝微粒也发挥促凝作用。人体的血液凝固需经历三个过程，即凝血因子活化、纤维蛋白形成和纤溶系统活化。现阶段，临床上主要的凝血功能试验多是以诱发血液中凝血因子自身活性为基础原理，实验过程都需要有凝血介质和促凝剂参与，如硅藻土、白陶土、玻璃微粒及磷脂悬液等促凝剂，主要用于凝血因子缺陷性疾病的诊断、促凝/抗凝蛋白活性测定以及临床抗凝药物监测，但此类方法的不足在于无法反映凝血启动的全貌，而且实验过程中诱导剂(激活剂)往往对特定病理过程不敏感。目前，由于宏观反映血液凝固启动阶段活化过程(即凝血因子初始激活)的检测方法尚缺乏，而传统凝血试验不能敏感的反映病人血浆促凝趋势以及高凝状态的类型，常造成医生在评估复杂临床情况下的凝血异常活化或缺陷疾病时缺乏足够的依据。

因此，基于这些问题，提供一种可反映人体在病理状态下的高凝状态和严重程度，并且重复性好、灵敏度高、操作简便的检测微粒促凝活性实验方法，具有重要的现实意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的检测人体高凝状态的方法，该方法可反映人体在某些病理情况下的高凝状态和严重程度，该实验重复性好、灵敏度高、操作简便。

本发明采取以下技术方案实现：

一种检测微粒促凝活性的实验方法，包括如下步骤：

步骤一：血浆标本的制备

取新鲜枸橼酸盐抗凝全血2ml，通过梯度离心的方法，得到无细胞血浆标本，吸取离心后的血浆上清备用；

步骤二：微粒促凝活性的检测方法

取一定量的无细胞血浆标本和Ca²⁺混匀，放入LTHCARE CENTURY(世纪亿康)凝血功能仪中检测，通过探针的振动感受血液粘稠度的改变，记录粘稠度改变时间。

优选的，所述步骤一中通过两次梯度离心，第一次梯度离心的离心条件为室温下1500g/20min，第二次梯度离心的离心条件为室温下13000g/2min。

优选的，所述步骤一中无细胞血浆标本的用量是200ul，Ca²⁺的浓度为0.02mmol/L，Ca²⁺的用量是170ul。

优选的，还包括微粒促凝活性实验的重复性实验，所述重复性实验包括如下步骤：

取该实验测定结果中时间长、短的两份血浆标本，分别各重复测定10次，其结果进行统计学分析，得到该实验的重复性结果。

优选的，还包括微粒浓度与纤维蛋白形成时间相关性的测定实验，包括如下步骤：