[发明专利]一种酶法制备低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的方法

权利要求书

1.微生物菌株芽孢杆菌 10066所产壳聚糖酶在制备低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖方面的应用。

2.一种低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，采用芽孢杆菌（Bacillus sp.）10066所产生的壳聚糖酶制备低分子量脱乙酰壳多糖，再对低分子量脱乙酰壳多糖衍生化制备低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖。

3.根据权利要求2所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将脱乙酰壳多糖粉末与纯化水按质量比为1:12-20进行混合搅拌，然后加入等摩尔数的酸进行溶解，完全溶解后加入适量采用芽孢杆菌（Bacillus sp.）10066所产生的壳聚糖酶在40~50℃下进行酶解；

步骤2：酶解结束后，用截留分子量为10kDa~20kDa的超滤膜过滤，滤过液再用200Da~300Da的纳滤膜浓缩分离，加入体积为所得浓缩液体积2~3倍的95%乙醇，沉淀，抽滤，保留固体；

步骤3：步骤2所得固体产物用浓度大于90%的乙醇浸泡2小时，按步骤2所得固体产物：氢氧化钠的质量比为1:1.2-1.5加入氢氧化钠；按步骤2所得固体产物：氯乙酸的质量比为1:1-3加入氯乙酸，在40~65℃下进行衍生化改性；反应结束后，抽滤，保留固体；

步骤4：对步骤3所得固体，用纯化水搅拌溶解，产物完全溶解后，过滤去除不溶物，向滤液中加入无水乙醇进行醇沉，抽滤，所得固体用80%-90%的乙醇进行洗涤至无氯离子，再用无水乙醇进行脱水两遍，干燥后得分子量小于10000Da的低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖。

4.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤1所述酸选自盐酸、乙酸和乳酸。

5.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤1所述壳聚糖酶的加入量为以壳聚糖5-20U/g的量加入。

6.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤1所述的酶解温度为40~50℃，优选的酶解温度为45℃。

7.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤3所添加浓度大于90%的乙醇的质量，为步骤2所得固体产物质量的6-10倍。

8.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤3所添加浓度大于90%的乙醇的质量，优选的为步骤2所得固体产物质量的8倍。

9.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤4中，搅拌溶解时，用纯化水的质量不超过步骤3所得固体质量的4.6-5.2倍。

10.根据权利要求3所述低分子量羧甲基脱乙酰壳多糖的制备方法，其特征在于，步骤4中，醇沉时，添加无水乙醇的体积为溶液体积的3.7-4.2倍。