[发明专利]从鸡蛋清中高效提取卵类黏蛋白的方法

说明书

本发明涉及一种从鸡蛋清中高效提取卵类黏蛋白的方法，该方法包括鸡蛋清溶液的样品制备、利用乙醇预处理蛋清溶液除杂蛋白、微波辅助硫酸铵第一步沉淀、微波辅助硫酸铵第二步沉淀四个步骤；所述的卵类黏蛋白提取工艺是采用微波功率140W、微波时间20s的参数来辅助硫酸铵沉淀过程。本发明解决了卵类黏蛋白分离纯化操作复杂、周期长、纯度及得率低等问题，利用微波技术诱导蛋白分子极化，及促进传质的效应，建立了一种新兴、简单、快速和高效的卵类黏蛋白提取方法，该方法大大缩短了普通盐析过程中的静置时间，简化操作过程，降低提取成本，提高分离效率，适用于大范围生产，为微波技术在禽蛋类蛋白提纯中的应用提供支持。

技术领域

本发明涉及卵类黏蛋白的高效提取方法，具体涉及一种从鸡蛋清中高效提取卵类黏蛋白的方法。

背景技术

鸡蛋清来源广泛，价格低廉，干物质中蛋白质含量超过80％，是最理想的蛋白质资源之一。卵类黏蛋白(ovomucoid，简称OVM)，约占鸡蛋清蛋白质总量的11％。其蛋白结构紧密，具有耐热、耐酸碱以及抗胰蛋白酶消化等特性，可引起免疫反应。卵类黏蛋白有抑制肿瘤和抗癌等重要的免疫学作用，可作为食品检测中的标记物，亦可用于预测儿童群体中鸡蛋过敏症的发生。因此纯化获得卵类黏蛋白，对食品和医药领域都具有非常重要的意义。

虽然蛋白质分离纯化的方法很多，但到目前为止还没有找到一种简单经济、适应范围较广的方法能够将卵类黏蛋白从复杂的鸡蛋组分中提取出来。早期，人们利用有机溶剂沉淀法提取卵类黏蛋白，例如三氯乙酸和丙酮溶剂，但是有机溶剂会导致卵类黏蛋白不同程度的变性。目前，卵类黏蛋白分离纯化方法报道较多的包括双水相萃取法、电泳法、层析法和沉淀法等。双水相萃取法和电泳法处理量小且不具有实际应用价值；层析法获得目标蛋白纯度高，但是处理量小成本大，技术也非常繁琐；目前分离纯化卵类黏蛋白的沉淀技术较多是利用盐析法沉淀，该方法简便易操作，但存在的问题是沉淀法所需静置时间较长，效率极低，分离所得的卵类黏蛋白纯度普遍低于90％。国外研究中，2009年AnupongTankrathok利用两步离子交换层析和沉淀相结合的方法纯化卵类黏蛋白(Tankrathok A,Daduang S,Patramanon R,et al.Purification Process for the Preparation andCharacterizations of Hen Egg White Ovalbumin,Lysozyme,Ovotransferrin,andOvomucoid[J].PREPARATIVE BIOCHEMISTRYBIOTECHNOLOGY,2009,39(4):380-399.)，但是回收效益低(纯度80％，回收率21％)且仅仅适用于实验室水平的制备。2012年史晓霞所使用的丙酮沉淀法(史晓霞.蛋清卵类粘蛋白分离纯化、结构表征及其过敏原性的研究[D].华中农业大学,2012.)提取出了纯度95.3％的卵类黏蛋白，但在利用冷丙酮进行沉淀处理后还需使用纤维素离子交换法再次纯化，步骤复杂，用时较长，且回收率仅仅达23.8％。E.D.N.S.Abeyrathne在2014年利用高浓度的乙醇与柠檬酸组合，从乙醇提取上清液中分离卵类黏蛋白(Abeyrathne E D N S,Lee H Y,Ahn D U.Separation of ovotransferrinand ovomucoid from chicken egg white[J].Poult Sci,2014,93(4):1010-1017.)，虽然蛋白回收率达到了95％，但其过程繁琐，多个步骤需要静置过夜，等待时间过长，不利于大规模制备；国内研究中，2014年王帅(王帅,吴子健,王素英,等.三步沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白[J].食品科学,2014,35(24):74-80.)使用三步盐析沉淀法纯化鸡卵类黏蛋白可取得较高纯度，但提取率仅为27.05％，过程中盐析反应耗时较长(12h左右)。因此，开发出一种操作简便、耗时短暂、纯度及回收率高的卵类黏蛋白分离纯化方法，将具有重要的应用价值。