[发明专利]一种高血压治疗药物相关基因的高通量测序方法及其应用

说明书

本发明属于高血压治疗药物相关基因检测领域，具体涉及一种高血压治疗药物相关基因的高通量测序方法及其应用。本发明公开了一种高血压治疗药物相关基因的高通量测序方法及其应用。该方法包括高血压治疗药物相关基因确定、高血压治疗药物相关基因扩增引物组合设计、基因组DNA提取与浓度检测、高血压治疗药物相关基因多重PCR扩增反应及产物纯化、接头序列PCR反应及产物纯化、文库质检以及高通量测序等步骤。该方法可实现一次性对与高血压治疗药物相关的33个基因的39个SNP位点进行分型检测，覆盖27种高血压治疗常用药物，检测位点更多、通量更高、数据准确性更高、更加经济，可为患者的个体化用药提供指导，提高药物治疗效率，降低毒副作用风险。

技术领域

本发明属于高血压治疗药物相关基因检测领域，具体涉及一种高血压治疗药物相关基因的高通量测序方法及其应用。

背景技术

高血压是我国最常见的慢性疾病之一，2019年《中国高血压防治指南2018年修订版》中，我国高血压疾病最新调查数据显示，2012年～2015年我国18岁及以上居民高血压患病粗率为27.9％，且我国人群高血压的患病率仍呈升高趋势。高血压作为心脑血管疾病最重要的危险因素之一，致残致死率高，流行态势严重，给家庭和社会造成沉重的经济和精神负担，已成为我国一项重要的公共卫生问题。

我国高血压控制现状严峻，据中国2015年高血压调查结果显示，中国≥18岁成人高血压的知晓率、治疗率和控制率分别为51.6％、45.8％和16.8％，治疗控制率为37.5％。临床治疗对于高血压的控制方法主要是改变饮食习惯和生活方式等非药物措施和药物治疗两方面。高血压控制率如此低，除了知晓率/治疗率低外，饮食及生活方式未改善，药物治疗疗效不尽人意，药物毒副作用较多，患者服药依从性差，缺乏个性化用药指导措施等均为重要的影响高血压疾病控制率的重要因素。

临床上常用的五大类降压药物分别为利尿药、β受体阻滞剂、钙通道阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂和血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂，可用药物种类繁多。药物基因组学研究进展表明，药物进入人体内，经过吸收、转运、代谢过程发挥作用，携带不同基因型的患者在上述药物作用过程中呈现的药物应答反应和反应程度均有一定差异，表现为个体的药物应答反应差异。2017年，卫计委合理用药专家委员会及中国医师协会高血压专业委员会发布的《高血压合理用药指南(第2版)》，明确提出：精准的用药指南就是要将个体的基因型考虑在内，量身定制用药方案，避免用药不当，真正做到精准的个性化用药。

目前，对高血压用药相关基因的检测主要有实时荧光PCR法和基因芯片法。实时荧光PCR法只能检测少数几个常见突变位点，所覆盖的药物种类有限，且该方法通量较低，费用高。基因芯片法虽然能够同时对多个已知待测SNP位点进行检测，但费用高、灵活性低，且只可检测已知位点。高通量测序(NGS)技术提供了一个高通量、高精确度的检测平台。多重PCR技术通过设计多对引物实现在同一反应体系中扩増出多个目标DNA片段的PCR反应，可同时进行多个SNP位点的分型检测，是一种快速、便捷且经济的文库构建和分型检测方法。利用高通量测序(NGS)和多重PCR技术相结合进行靶向扩增测序，可实现高血压疾病治疗药物相关基因分型检测，通量高、精确度高、更经济。

发明内容

鉴于上述现有技术中存在的缺陷和不足，本发明的目的是提供一种高血压治疗药物相关基因的高通量测序方法及其应用。该方法包括高血压治疗药物相关基因确定、高血压治疗药物相关基因扩增引物组合设计、基因组DNA提取与浓度检测、高血压治疗药物相关基因多重PCR扩增反应及产物纯化、接头序列PCR反应及产物纯化、文库质检以及高通量测序等步骤，该方法可一次性对与高血压疾病治疗用药相关的33个基因的39个SNP位点进行检测，覆盖27种高血压疾病治疗常用药物，最大限度的为患者的个体化用药提供指导。

一种高血压治疗药物相关基因的高通量测序方法，其具体包括如下步骤：

(1)根据高血压治疗药物相关基因(根据高血压治疗药物的特征，确定影响高血压治疗药物相关