[发明专利]一种扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法

说明书

本发明提供了一种扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法，包括以下步骤(1)采用添加一定量的纯化的草原毛虫核型多角体病毒A的喂养饲料喂养甜菜夜蛾幼虫一段时间，然后采用正常的喂养饲料进行喂养，喂养至甜菜夜蛾幼虫死亡或化蛹；(2)从死亡的甜菜夜蛾幼虫的虫尸中提取得到草原毛虫核型多角体病毒B。通过本发明扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法能得到杀死草原毛虫的草原毛虫核型多角体病毒，能够实现利用人工饲养的甜菜夜蛾幼虫扩增草原毛虫核型多角体病毒，解决了扩增草原毛虫核型多角体病毒虫源的难题，可实现大量扩增草原毛虫核型多角体病毒，从而实现草原毛虫核型多角体病毒的商品化。

技术领域

本发明涉及草原毛虫核型多角体病毒技术领域，尤其涉及一种扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法。

背景技术

草原毛虫为我国高原牧区的重要害虫，别名红头黑毛虫、草原毒蛾，属于鳞翅目、毒蛾科，全球共有15种草原毛虫，主要分布在极地和高寒地带。草原毛虫主要为害莎草科、禾本科、豆科、蓼科、蔷薇科等各类牧草，草原毛虫爆发时危害严重，将牧草的大部分茎叶吃光，只剩下枯枝残叶，影响牧草生长，造成草原缺草，严重影响畜牧业的发展[马利青，青海畜牧兽医杂志， 2013,43(1):40-42]。草原毛虫不仅危害牧草，而且对人畜也有一定的影响，其体毛和茧毛有剧毒，牛羊采食了带虫或茧的牧草，会引起口腔粘膜红肿，发生小泡，齿根或舌头糜烂等[尼玛，等.畜牧与兽医，2011,44(4):111]。

草原毛虫核型多角体病毒(Gynaephora ruoregensis Nuclear PolyhedrosisVirus，简称GrNPV)对草原毛虫有较强的毒力，GrNPV对人和脊稚动物无感染性、致病性和其它毒性[杨志荣，等.四川大学学报(自然科学版)， 1990(2):232-238.]，而且能够通过水平扩散和垂直传递在害虫种群内形成病毒。刘世贵等于1982-1983年在川西北草原首次分离到GrNPV，初步生测实验表明 GrNPV对草原毛虫具有较强的感染致死能力[刘世贵,等.四川大学学报(自然科学版)，1984,01:104-112.]。刁治民于1987年从青海省海北州草地上罹病死亡青海草原毛虫幼虫分离获得GrNPV，试验结果显示GrNPV对草原毛虫有较强的毒力，其杀虫效果达85％，并有后效作用[刁治民，草业科学，1996,13(3):50-54]。王金昌到尕海-则岔国家自然保护区利用草原毛虫成功扩增了草原毛虫核型多角体病毒GrNPV[王金昌,等.生物化工，2017,3(1):21-24.]。

但是利用草原毛虫扩增草原毛虫核型多角体病毒GrNPV面临着一个难题，就是草原毛虫虫源的问题。野生的草原毛虫只有在5月、6月和7月这三个月才适合扩增草原毛虫核型多角体病毒GrNPV。草原毛虫的人工饲养目前也没有解决，所以利用草原毛虫难以大量扩增了草原毛虫核型多角体病毒GrNPV，难以实现草原毛虫核型多角体病毒GrNPV的商品化。

为此，本发明提供了一种扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法来解决上述缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种利用甜菜夜蛾幼虫来扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法，解决了采用草原毛虫虫源面临的问题，能够实现大量扩增草原毛虫核型多角体病毒。

为实现上述目的，本发明提供一种扩增草原毛虫核型多角体病毒的方法，包括以下步骤：

(1)采用添加一定量的纯化的草原毛虫核型多角体病毒A的喂养饲料喂养甜菜夜蛾幼虫一段时间，然后采用正常的喂养饲料进行喂养，喂养至甜菜夜蛾幼虫死亡或化蛹；

(2)从死亡的甜菜夜蛾幼虫的虫尸中提取得到草原毛虫核型多角体病毒B。

较佳地，步骤(1)中，甜菜夜蛾幼虫的获得包括：将甜菜夜蛾虫卵放置于恒温培养箱中，进行孵化，采用人工饲养甜菜夜蛾幼虫至3龄。

较佳地，步骤(1)中，草原毛虫核型多角体病毒A的获得包括：