[发明专利]多重连接探针微阵列检测

权利要求书

1.一种基于表面探针的定量PCR检测体系，所述检测体系包括：

(a)一固相载体，所述固相载体的一个主表面设有n个子检测区，其中，n为≥2的正整数，并且至少一个子检测区为表面定量子检测区；

其中，所述的各表面定量子检测区各自独立地固定有淬灭产物捕获核酸，所述淬灭产物捕获核酸为单链核酸，并且所述淬灭产物捕获核酸的一端固定于所述的固相载体的表面，并且所述淬灭产物捕获核酸带有第一可检测标记物，所述的第一可检测标记物选自下组：荧光基团、发光标记物、量子点；

(b) 第一探针；

(c) 第二探针；

(d) 用于连接所述第一探针和第二探针，形成第三探针的连接酶；

(e) 用于扩增所述第三探针的引物对，其中所述引物对包括第一引物和第二引物，其中第一引物和第二引物中至少一个引物为淬灭引物，所述淬灭引物的一端或一侧连接有淬灭基团，

并且，所述淬灭引物通过扩增生成的淬灭扩增产物与至少一个表面定量子检测区的淬灭产物捕获核酸是可结合从而形成双链结构，并且在所述双链结构中，所述的淬灭扩增产物的淬灭基团使得所述捕获核酸的第一可检测标记物的信号被淬灭；

所述第一探针具有式II结构：

X₂’-T₂’ (II)

其中，X₂’为5’端通用型扩增引物反向互补序列；

T₂’为靶向基因5’端特异性序列的反向互补序列；

所述第二探针具有式III结构：

T₁’-P₁’-X₁’ （III）

其中，T₁’为靶向基因3’端特异性序列的反向互补序列；

P₁’为标记基因扩增组合的barcode index序列；

X₁’为3’端通用型扩增引物反向互补序列；

并且，所述淬灭产物捕获核酸含有P₁^’， 所述的淬灭扩增产物含有P₁，P₁与P₁^’互补结合。

2.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，X₂’长度为15-50nt。

3.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，T₂’的长度为15-60 nt。

4.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，T₁’的长度为15-60 nt。

5.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，P₁’的长度为10-500 nt。

6.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，X₁’的长度为15-50 nt。

7.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述第三探针具有式IV结构：

X₂’-T₂’-T₁’-P₁’-X₁’ （IV）

其中，X₂’为5’端通用型扩增引物反向互补序列；

T₂’为靶向基因5’端特异性序列；

T₁’为靶向基因3’端特异性序列；

P₁’为标记该基因扩增组合的barcode index序列；

X₁’为3’端通用型扩增引物反向互补序列。

8.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的第一引物和第二引物扩增出的扩增产物的长度为50－2000 bp。

9.如权利要求1所述的检测体系，其特征在于，所述的第一探针的长度为35－120nt。