[发明专利]固定化酶载体的修饰方法及应用在审
申请号: | 201910700725.4 | 申请日: | 2019-07-31 |
公开(公告)号: | CN112301025A | 公开(公告)日: | 2021-02-02 |
发明(设计)人: | 金倩茹;辛本荣;郑妍 | 申请(专利权)人: | 丰益(上海)生物技术研发中心有限公司 |
主分类号: | C12N11/14 | 分类号: | C12N11/14;C12N11/02;C12N9/20;C12P7/64 |
代理公司: | 北京英赛嘉华知识产权代理有限责任公司 11204 | 代理人: | 王达佐;洪欣 |
地址: | 200137 上海市浦*** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 固定 载体 修饰 方法 应用 | ||
1.固定化酶载体的修饰方法,其包括以下步骤:
使固定化酶载体,优选多孔无机材料,与醇溶蛋白接触;
优选地,所述接触步骤包括将包含醇溶蛋白与固定化酶载体的混合物进行静置、振荡或搅拌处理,或者将醇溶蛋白溶液循环通过所述固定化酶载体,得到处理后的混合物,并干燥所述处理后的混合物。
2.如权利要求1所述的方法,其中
所述醇溶蛋白溶解于60%-95%(v/v)的醇类水溶液或丙酮中,优选地,所述醇溶蛋白溶解于70%(v/v)的丙酮或95%(v/v)的乙醇中;和/或
所述醇溶蛋白的质量浓度为0.01%-2%(w/v),优选为0.1%-1%(w/v),更优选为0.5%(w/v);和/或
所述醇溶蛋白与所述固定化酶载体的质量比为1:2-1:100,优选为1:40-1:60,更优选为1:40、1:50或1:60;和/或
所述处理的时间为10min-6h,优选为1-3h,更优选为1h或3h;和/或
所述干燥为旋转蒸发、真空干燥、冷冻干燥、烘箱干燥或自然干燥,优选为旋转蒸发;和/或
所述接触步骤的次数为1-10次,优选为1-3次,更优选为1次或3次。
3.固定化酶载体,其包含醇溶蛋白。
4.根据权利要求1或2所述的方法制备的修饰的固定化酶载体、或权利要求3所述的固定化酶载体在制备固定化酶组合物中的用途。
5.固定化酶组合物的制备方法,其包括将根据权利要求1或2所述方法制备的修饰的固定化酶载体或权利要求3所述的固定化酶载体与待固定的酶接触的步骤,并且任选地包括将根据权利要求1或2所述方法制备的修饰的固定化酶载体或权利要求3所述的固定化酶载体、待固定的酶和多羟基化合物接触的步骤;
优选地,所述接触步骤包括将包含根据权利要求1或2所述方法制备的修饰的固定化酶载体或权利要求3所述的固定化酶载体与待固定的酶的混合物进行振荡处理,任选地将包含根据权利要求1或2所述方法制备的修饰的固定化酶载体或权利要求3所述的固定化酶载体、待固定的酶和多羟基化合物的混合物进行振荡处理,得到振荡处理后的混合物,干燥所述振荡处理后的混合物。
6.如权利要求5所述的方法,其中
所述酶的质量浓度为1-30mg/mL,优选为2.5-25mg/mL,更优选为2.5mg/mL、10mg/mL或25mg/mL;和/或
所述振荡处理的时间为0.5h-48h,优选为1h-5h,更优选为4h;和/或
所述振荡处理的温度为4℃-25℃,优选为20-25℃,更优选为25℃;和/或
所述干燥为喷雾干燥、真空干燥或冷冻干燥。
7.固定化酶组合物,其包含根据权利要求1或2所述方法制备的修饰的固定化酶载体或权利要求3所述的固定化酶载体和酶;任选地,所述固定化酶还包含多羟基化合物。
8.如权利要求7所述的固定化酶组合物,其中
所述固定化酶组合物中,所述酶的含量为1wt.%-10wt.%,优选为1wt.%、3.8wt.%、4.0wt.%、4.1wt.%、4.2wt.%、4.5wt.%或9.9wt.%;和/或
所述固定化酶组合物中,所述多羟基化合物的含量为0wt.%-50wt.%,优选为0wt.%-40wt.%,更优选为0wt.%、11.7wt.%、12.3wt.%、12.7wt.%、13.0wt.%、24.8wt.%或37.6wt.%;和/或
所述固定化酶组合物中,所述固定化酶载体的含量为40wt.%-95wt.%,优选为50wt.%-90wt.%,更优选为50.1wt.%、62.1wt.%、70.3wt.%、73.8wt.%、75.9wt.%、77.9wt.%或87.1wt.%;和/或
所述醇溶蛋白的含量为1wt.%-5wt.%,优选为1wt.%-3wt.%,更优选为1.2wt.%、1.3wt.%或2.4wt.%。
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