[发明专利]多维、多价、前列腺癌特异性肿瘤抗原组装体的制备方法

说明书

多维、多价、前列腺癌特异性肿瘤抗原组装体的制备方法。本发明以培养的牛结核分枝杆菌属(卡介苗BCG)菌体，经分离、精制、纯化后，获得的菌体蛋白为基础载体。其作用可充分调动和激发机体自身免疫系统的免疫应答反应。用纳米级高分子材料作为多重连接臂，利用其自身经修饰的结构官能团。以共价键或非共价键结合方式，连接菌体蛋白和特定的前列腺癌肿瘤抗原多肽基因片段。完成多维、多价立体构型的、桥式连接模式，制备具有生物安全性高、特异性抗原明确、自身致敏原性强等特点的，多维、多价、前列腺癌特异性肿瘤抗原组装体。本发明可用于前列腺癌特异性抗体制备；人用前列腺癌疫苗的精准研发和生产，具有良好的广泛应用前景。

技术领域

本发明属于属于生物医药制备技术领域。

背景技术

前列腺癌是威胁老年男性生命安全的主要恶性癌症之一。在美国，前列腺癌是男性的第二大肿瘤杀手，随着中国生活水平的提高，我国的前列腺癌的发病率逐渐升高，目前居于世界第10位。前列腺癌的治疗方式为手术治疗、雄激素剥夺治疗(去势治疗)、主动监测等，然而经过一段时间的去势治疗后转化为激素非依懒性前列腺癌，造成患者的死亡。因此，目前我们需要寻找高效的前列腺癌的控制和治疗策略。

近几年，免疫治疗被认为是最有可能攻克肿瘤的途径之一。伴随着分子生物学技术手段的进步，免疫学也在快速的发展，FDA已批准多个免疫相关的药物上市，如PD-1的抗癌药Opdivo。2010年美国FDA批准Sipuleucel-T上市，该药是首个由美国FDA批准的用于治疗的肿瘤疫苗，用于去势抵抗性前列腺癌的治疗。该药由自体树突状细胞与融合蛋白PA2024体外共孵化获得，其中PA2024是一种由前列腺酸性磷酸酶(PAP)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)构建的融合蛋白。不过该药的效果并不是很理想，观察到患者中位生存期延长4个月，但是临床试验并没有显示出肿瘤缩小或疾病反应率的提升。由于PAP为分泌性蛋白，在前列腺癌细胞的表面分布相对较少，造成特异性活化的效应T细胞杀伤效率较低。随着二代测序技术的普及，多个在前列腺癌细胞中特异性高表达的膜蛋白相继发现，如PMSA、PSCA、STEAP1、FXYD3等，为前列腺癌的特异性免疫治疗提供了更多的靶点。

由于前列腺癌患者多为老年人且部分为冷肿瘤生长缓慢，侵袭性低，对于预期寿命较短的患者，采取积极有效的保守治疗不仅提高了患者的生存质量，还能为社会和家庭节约大量的医疗资金。肿瘤疫苗为前列腺癌的第二级预防和第三级预防提供了新的思路，通过前列腺癌肿瘤疫苗的使用达到延缓肿瘤发展的作用。

蛋白组装体技术属于高分子化学和超分子化学与生物的交叉领域。整体骨架以蛋白为基础，以人工设计和修饰的纳米级材料为连接臂，通过共价键或者非共价键的方式，连接两端的蛋白质和特异性标致多肽，使其形成具有一定空间构象和特异性抗原决定簇的组装体。卡介苗不仅作为预防结核病的疫苗，在膀胱癌的灌注治疗中也具有良好的反应性，后续研究表明由于卡介苗激活了免疫系统而发挥抗肿瘤的作用。对于其激活免疫系统有效亚成分的研究中发现，多种菌体蛋白发挥了重要作用。基于菌体蛋白，前列腺膜抗原的蛋白组装体为前列腺癌的预防和治疗，提供了一个新的思路和可行性的方案。

发明内容

本发明目的是解决使用前列腺特异性抗原肽引起的免疫杀伤低下，治疗效果不佳的问题，联合生物和高分子化学领域，提供一种多维、多价、前列腺癌特异性肿瘤抗原组装体的制备方法。

本发明的技术方案

多维、多价、前列腺癌特异性肿瘤抗原组装体的制备方法，以培养的牛结核分枝杆菌属即卡介苗BCG菌体经分离、精制、纯化后，获得的菌体蛋白为基础载体，以纳米级高分子材料为桥接连接体，在所述菌体蛋白上连接前列腺癌特异性肿瘤抗原多肽基因片段，构建成多维、多价、前列腺癌特异性肿瘤抗原组装体。