[发明专利]金属硫蛋白表达载体及其应用

权利要求书

1.一种金属硫蛋白表达载体，其特征在于，包括由金属硫蛋白的编码序列作为目标蛋白插入类伴侣样蛋白的下游所形成的融合蛋白表达载体，其中，所述类伴侣样蛋白为序列如SEQ ID NO：3所示的链球菌蛋白G的B3结构域PGB3。

2.如权利要求1所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，所述金属硫蛋白为金属硫蛋白-1、金属硫蛋白-2、金属硫蛋白-3或金属硫蛋白-4。

3.如权利要求2所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，所述金属硫蛋白-1包括金属硫蛋白-1A、金属硫蛋白-1B、金属硫蛋白-1E、金属硫蛋白-1F、金属硫蛋白-1G、金属硫蛋白-1H、金属硫蛋白-1M、金属硫蛋白-1R和金属硫蛋白-1X中的任意一种。

4.如权利要求3所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，所述金属硫蛋白-1为人金属硫蛋白-1F，所述人金属硫蛋白-1F的氨基酸编码序列如SEQ ID NO：4所示；或者，

所述金属硫蛋白-2为人金属硫蛋白-2，所述人金属硫蛋白-2的氨基酸编码序列如SEQID NO：5所示；或者，

所述金属硫蛋白-3为人金属硫蛋白-3，所述人金属硫蛋白-3的氨基酸编码序列如SEQID NO：6所示；或者，

所述金属硫蛋白-4为人金属硫蛋白-4，所述人金属硫蛋白-4的氨基酸编码序列如SEQID NO：7所示。

5.如权利要求1所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，所述PGB3的编码序列下游包含一段柔性接头序列，所述柔性接头序列下游包含一段分离纯化标签序列，所述分离纯化标签序列与所述目标蛋白的编码序列之间包含一段肽链切割识别序列；和/或，

所述PGB3编码序列的N端添加有如SEQ ID NO：8所示的起始适配序列。

6.如权利要求5所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，

所述柔性接头序列包括6～30个氨基酸；

所述分离纯化标签序列包含2～11个组氨酸；

所述肽链切割识别序列包括凝血因子Xa、凝血酶、肠激酶、TEV酶和羟胺中任意一种的切割识别序列。

7.如权利要求6所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，所述柔性接头序列包括22个氨基酸，序列如SEQ ID NO：10所示；

所述分离纯化标签序列标签包含9个内置组氨酸，序列如SEQ ID NO：11所示；

所述肽链切割识别序列为凝血因子Xa的切割识别序列，序列如SEQ ID NO：12所示。

8.如权利要求1所述的金属硫蛋白表达载体，其特征在于，所述金属硫蛋白表达载体经过密码子与整体序列优化，且优化后的DNA编码序列如SEQ ID NO：17～20中的任一所示。

9.一种包含如权利要求1至8任意一项所述的金属硫蛋白表达载体的金属硫蛋白表达工程菌株。