[发明专利]拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12分子标记及其应用

权利要求书

1.拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12的分子标记，其特征在于,引物对碱基序列如下：

6SS-1：

F：5’-GTATTCATCAAGTTTACCAGTCCA-3’（SEQ ID NO.1），

R：5’-GAAGAGGACCTTATGACCCAGA-3’（SEQ ID NO.2）。

2.一种权利要求1所述的拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12的分子标记的应用，其特征在于使用权利要求1所述的拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12的分子标记对小麦背景中是否含有拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12进行检测或辅助检测。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于检测或辅助检测的步骤如下：

（1）以待测的可能含有拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12小麦背景系的基因组总DNA为模板，用权利要求1所述的引物对分别对模板或对照组进行PCR扩增，扩增结果使用凝胶电泳进行检测；

（2）如果待测模板DNA凝胶电泳检测图谱中含有480bp特异性条带，则待测样品中含有拟斯卑尔脱山羊草抗白粉病基因Pm12；若扩增产物中含有250bp特异性条带，则待测样品中含有簇毛麦抗白粉病基因Pm21。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，引物6SS-1的PCR反应体系为：25µL PCR反应体系中含约10-20ng模板DNA，1×PCR buffer，200mmol L^-1dNTP，上、下游引物终浓度各为0.2µmol L^-1，1U Taq DNA聚合酶，用无菌蒸馏水补充反应体系至25µL；

PCR反应程序：94℃预变性3分钟；94℃变性20秒，50℃-60℃退火30秒，72℃延伸60秒，35个循环；72℃延伸5分钟；4℃保存。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，6SS-1引物扩增产物采用6%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，用银染法染色。