[发明专利]一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合及其制备方法和应用。所述结合蛋白组合由检测恶性疟原虫HRP2的结合蛋白1、结合蛋白2和检测间日疟原虫LDH的结合蛋白3、结合蛋白4组成，所述结合蛋白1～4的氨基酸序列如SEQ ID NO:5～8所示。本发明采用噬菌体展示技术以恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH为靶抗原，从噬菌体展示蛋白文库中淘选亲和力高、特异性好的结合蛋白组合。利用基因工程技术进行重组表达和纯化，以此结合蛋白组合试剂替代疟疾免疫检测中用抗体试剂，建立胶体金层析快速检测方法，所得试剂盒的储存稳定性高于现有临床检测产品，具有可靠、准确、安全、简便、稳定的优点。

技术领域

本发明涉及噬菌体展示技术领域，具体地，涉及一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合及其制备方法和应用。

背景技术

疟疾是全球最严重的三大传染病之一，全世界约一半人口面临疟疾风险，在我国，仍然有部分地区存在疟疾感染病例。由于疟疾的传播与携带、病情潜伏等方式比较特殊，快速诊断在疟疾检测中显得很重要。

疟疾检测技术发展至今，临床检测方法主要包括镜检、免疫检测(免疫层析法、酶联免疫法)和PCR核酸扩增测试。其中，镜检和PCR核酸扩增存在效率低、检测费用昂贵等问题；免疫检测则存在产品保存困难，原材料昂贵等问题，无法在东南亚、非洲等疟疾病情传播严重的发展中国家快速推广应用。

因此，需要研发一种新的疟疾检测方法，能够快速、准确检测疟疾的同时，降低检测难度和成本。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的上述不足，提供一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合。

本发明的另一目的在于提供一种编码上述结合蛋白组合的基因组合。

本发明的另一目的在于提供上述结合蛋白组合的制备方法。

本发明的另一目的在于提供上述结合蛋白组合在制备检测疟疾的试剂中的应用。

本发明的另一目的在于提供一种检测疟疾的试剂的制备方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：

一种检测恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH的结合蛋白组合，所述结合蛋白组合由检测恶性疟原虫HRP2的结合蛋白1、结合蛋白2和检测间日疟原虫LDH的结合蛋白3、结合蛋白4组成，所述结合蛋白1～4的氨基酸序列如SEQ ID NO:5～8所示。

一种编码上述结合蛋白组合的基因组合，所述基因组合的核苷酸序列如SEQ IDNO:1～4所示。

其中，编码结合蛋白1的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，编码结合蛋白2的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，编码结合蛋白3的基因的核苷酸序列如SEQ IDNO:3所示，编码结合蛋白4的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示。

本发明还请求保护上述结合蛋白组合的制备方法，包括以下步骤：将含有上述基因组合(由编码与恶性疟原虫HRP2和间日疟原虫LDH特异性反应的结合蛋白组合的核苷酸序列组成)的噬菌体加入接种有ER2738大肠杆菌的培养液中，于37℃、90转/分钟条件下培养1小时；然后涂布于LB琼脂培养平皿上，加入100μg/mL羧苄青霉素后在室温下培养过夜；次日，将菌落刮入5mL的2TY培养基，再接种到含有100μg/mL羧苄青霉素的25mL 2TY培养基中，使其浓度达到OD_600nm＝0.2，于转速225转/分钟、37℃下培养1 小时，用10⁹复杂度的M13K07辅助噬菌体侵染；在转速90转/分钟下培养1小时后，加入25μg/mL的卡那霉素，细胞在转速170转/分钟下25℃孵育过夜，噬菌体用6％的 PEG8000、0.3M NaCl沉淀析出，重悬于1mL pH8.0的含有10mM Tris、1mM EDTA的缓冲液中即得。