[发明专利]一种人子宫内膜干细胞复合修复因子的制备方法及应用

说明书

本发明公开了一种人子宫内膜干细胞复合修复因子的制备方法及应用，其中，制备方法具体包括如下步骤：从人子宫内膜组织中分离得到人子宫内膜干细胞；人子宫内膜干细胞经体外消化分离与扩大培养，获得高质量的人子宫内膜干细胞；再将高质量的人子宫内膜干细胞进行工厂化放大培养，收集P3‑P6代的干细胞培养上清液；干细胞培养上清液经浓缩、蛋白含量测定、质检，得到人子宫内膜干细胞浓缩因子；将人子宫内膜干细胞浓缩因子与冻干保护剂混合后，冷冻干燥得到人子宫内膜干细胞冻干粉；将人子宫内膜干细胞冻干粉与溶媒混合，即获得人子宫内膜干细胞复合修复因子。本发明具有显著的治疗效果，无痛苦，不手术，不开刀，无副作用，安全高效。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种人子宫内膜干细胞复合修复因子的制备方法及应用。

背景技术

子宫对于女性的一生至关重要，人类子宫内膜是人体新陈代谢和自我更新最为活跃的组织之一。但是，一旦子宫内膜损伤，则会造成一系列后果。由于人流或妇科炎症导致子宫内膜受损，子宫内膜损伤严重会直接造成内膜生理性修复障碍。最终引起习惯性流产、宫腔粘连、闭经甚至不孕不育等并发症。子宫内膜损伤还会导致宫颈炎、子宫内膜炎、子宫内膜息肉、子宫内膜损伤、子宫肌瘤及癌前病变等。

宫内膜干细胞 (Endometrial Derived Stem Cells , EDSCs)是具有自我更新、多向分化及增殖能力的未分化子宫内膜细胞。子宫内膜干细胞是子宫内膜再生和修复的种子细胞，其数量、分布、分化、增殖以及调控机制发生异常都可能成为子宫内膜疾病的根源。由于子宫内膜取材方便且不受道德及法律问题的限制，使子宫内膜干细胞在妇科疾病的治疗方面有着广泛的应用前景。

现有的私密治疗技术对子宫内膜修复难度大，治疗时间长，经常采用病变组织或器官切除治疗方法，给很多女性带来了极大的困扰。采取有效的方法治疗子宫内膜损伤，促进内膜修复，并阻止其并发症的发生，对妇科疾病的治疗显得尤为重要。

鉴于此，本发明提供了一种宫内膜干细胞修复因子冻干粉和溶媒的制备技术，该宫内膜干细胞修复因子保存时间长，安全高效，对于妇科炎症、子宫肌瘤、子宫内膜损伤、卵巢功能下降有显著的治疗效果。

发明内容

本发明的目的在于提供一种人子宫内膜干细胞复合修复因子的制备方法及应用，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种人子宫内膜干细胞复合修复因子的制备方法，具体包括如下步骤：

S1、从人子宫内膜组织中分离得到人子宫内膜干细胞；

S2、人子宫内膜干细胞经体外消化分离与扩大培养，获得高质量的人子宫内膜干细胞；

S3、再将高质量的人子宫内膜干细胞进行工厂化放大培养，收集P3-P6代的干细胞培养上清液；

S4、干细胞培养上清液经浓缩、蛋白含量测定、质检，得到人子宫内膜干细胞浓缩因子；

S5、将人子宫内膜干细胞浓缩因子与冻干保护剂混合后，冷冻干燥得到人子宫内膜干细胞冻干粉；

S6、将人子宫内膜干细胞冻干粉与溶媒混合，即获得人子宫内膜干细胞复合修复因子。

优选的，所述步骤S2中人子宫内膜干细胞体外消化分离与扩大培养方法的具体步骤为：

步骤一：在超净台内，对获取的人子宫内膜干细胞的组织材料剪碎成3-5mm的细条，用无菌D-hanks溶液（含有青链霉素）洗剂3次；

步骤二：将清洗过的组织置入300mg/ml的Ⅲ胶原酶和40mg/ml的Ⅰ型脱氧核糖核酸酶溶液中，在此消化过程中，始终保持组织浸泡于消化酶中；