[发明专利]一种增强T4 DNA连接酶原核表达的方法

说明书

本发明公开了α,ω‑二元醇在提高T4 DNA连接酶原核表达中的应用。本发明利用1,6‑己二醇及其同分异构体(1,5‑己二醇或2,5‑己二醇)，应用于T4 DNA连接酶原核表达体系中，从而有效地提高T4 DNA连接酶表达产量。由此可以解决现有技术中T4 DNA连接酶生产耗时、耗力的问题，本发明为T4 DNA连接酶的大规模工业化生产提供了很大的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学及生物医药技术领域，更具体地，涉及一种ɑ,ω-二元醇及其同分异构体有效地促进T4 DNA连接酶原核表达的方法。

背景技术

DNA连接酶通过催化核酸切口处两个核苷酸的3’-羟基和5’-磷酸末端形成磷酸二酯键，从而连接两段双链DNA或RNA分子，在DNA的修复和重组过程中发挥重要作用，广泛存在于真核生物、古细菌和多种病毒中。T4 DNA连接酶是一种依赖于ATP供能的连接酶，能连接单缺口、粘性末端、平末端双链DN A、双链RNA或者DNA/RNA杂交体，作为一种基因工程工具酶被广泛应用于分子生物学领域。科学家最早于1967年从T4噬菌体感染的大肠杆菌中提取得到T4 DNA连接酶，但这种方法只能获得极其微量的T4 DNA连接酶。后来发现利用λT4噬菌体溶源菌分离纯化T4 DNA连接酶可以获得更高的产量。目前，将携带T4 DNA连接酶基因的质粒转入大肠杆菌中通过原核表达获取T4 DNA连接酶已成为常用方法。但是T4 DNA连接酶每年消耗量巨大，原核表达纯化T4DNA连接酶耗时、耗力。因此，寻找提高T4 DNA连接酶原核表达产量的方法具有重大工业价值。

1,6-己二醇是一种ɑ,ω-二元醇，分子式为C₆H₁₄O₂，外表为白色针状晶体，可溶于水和乙醇，同分异构体有1,5-己二醇，2,5-己二醇，1,2-己二醇等。作为一种重要的化工中间体，能与有机酸、酸酐、异氰酸盐等反应产生各种类型的化合物，广泛应用于生产增塑剂、聚酯树脂、光固化剂、聚氨酯高弹体等领域。在基础生物医学研究领域，最新的研究表明1,6-己二醇可以通过破坏疏水作用，引起无膜结构颗粒的液-液相分离，因此可作为研究细胞无膜结构生理特性的工具。

目前鲜有关于1,6-己二醇应用于基础生物医药领域的研究报道，其应用前景值得我们进一步去发掘。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种增强T4 DNA连接酶原核表达的方法。

本发明的第一个目的是提供α,ω-二元醇在提高T4 DNA连接酶原核表达中的应用。

本发明的第二个目的是提供一种T4 DNA连接酶原核表达的方法。

为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案予以实现的：

发明人经过创造的研究发现1,6-己二醇或者其同分异构体1,5-己二醇，2,5-己二醇应用于T4 DNA连接酶原核表达中，能在DNA水平和mRNA水平提高T4 DNA连接酶的表达量。因此本发明要求保护以下内容：

α,ω-二元醇在提高T4 DNA连接酶原核表达中的应用。

优选地，所述α,ω-二元醇为己二醇。

更优选地，所述α,ω-二元醇为1,6-己二醇、1,5-己二醇或2,5-己二醇中的一种或几种。

最优选地，所述α,ω-二元醇为1,6-己二醇。

一种T4 DNA连接酶原核表达的方法，在T4 DNA连接酶原核表达体系中添加α,ω-二元醇。

T4 DNA连接酶原核表达体系为培养有表达T4 DNA连接酶的原核表达菌株及其培养基。

所述的菌株为大肠杆菌BL21(DE3)。