[发明专利]肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法

说明书

本发明提供一种肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法。该试剂盒包括校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物。

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，具体而言涉及一种肺炎支原体检测用试剂盒、其制备方法以及肺炎支原体的检测方法。

背景技术

肺炎支原体(M.Pneumonia)属细胞外寄生菌，是人类原发性非典型肺炎的病原体。支原体大小介于细菌与病毒之间，是已知能独立生活的病原微生物中最小者。含DNA和RNA，缺乏细胞壁，呈球形、杆状、丝状等多种形态。它由口、鼻分泌物经空气传播，引起散发和小流行的呼吸道感染，主要见于儿童和青少年，秋冬季较多。呼吸道感染有咽炎和支气管炎，少数累及肺。肺炎支原体(MP)是引起支原体肺炎的主要病原体，严重的支原体肺炎也可导致死亡。

进行MP检测，对明确患者MP病原学诊断、防止抗菌药物滥用、MP病原流行病学监测，及有效防止病区院内交叉感染等方面都具一定的临床应用价值。

目前，临床上对MP的检查主要是MP的抗体检测、核酸检测、培养鉴定法和抗原检测。IgM抗体检测是诊断肺炎支原体感染的常用方法。但是儿童肺炎支原体感染往往需要1周左右机体才能产生IgM抗体，所以MP-IgM检查不利于感染早期诊断。核酸检测需要在聚合酶链反应(PCR)实验室中进行，检测时间长，成本高。MP生长缓慢，培养法最长可能要几周才能确定MP是否生长。抗原直接检测才是最合适的方法。目前大多是用微孔板的酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测，该方法适用于批量标本的检测，不适用于单个标本的随到随检。还有胶体金法，该方法灵敏度低，准确度不高。

发明内容

已经鉴于前述问题做出本发明。本发明的目的在于提供一种可操作性强、重复性好并且灵敏度高的肺炎支原体检测用试剂盒，并且提供其制备方法以及肺炎支原体的检测方法。

本发明的肺炎支原体检测用试剂盒包括：校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物。

在本发明的试剂盒中，所述校准品包括在1×10³～1×10⁵CFU/mL范围内的2个以上不同浓度的肺炎支原体抗原的校准品。

在本发明的试剂盒中，所述标记抗体试剂为吖啶酯类化合物标记的肺炎支原体检测抗体，所述吖啶酯类化合物为选自吖啶酯、吖啶酯磺酰胺、吖啶酯甲苯磺酰胺、吖啶酯对甲基磺酰胺和吖啶酯三氟甲基磺酰胺中的一种，并且所述吖啶酯类化合物优选为吖啶酯。

在本发明的试剂盒中，所述磁微粒试剂为磁微粒包被的抗肺炎支原体单克隆捕获抗体。

在本发明的试剂盒中，所述磁微粒的粒径为1～5μm，表面电荷密度为5～50μmol/g。

在本发明的试剂盒中，所述激发物包括第一激发物和第二激发物，并且所述第一激发物为硝酸过氧化氢水溶液，所述第二激发物为氢氧化钠水溶液。

在本发明的试剂盒中，所述样本处理液为三羟甲基氨基甲烷水溶液。

本发明还提供一种肺炎支原体检测用试剂盒的制备方法，所述试剂盒包括校准品、样本处理液、磁微粒试剂、标记抗体试剂、清洗液和激发物，该制备方法包括以下步骤：

样本处理液配置步骤：配置样本处理液，

校准品制备步骤：配置校准品稀释液，以所述校准品稀释液将重组肺炎支原体稀释为不同浓度的肺炎支原体抗原的校准品，

标记抗体试剂制备步骤：使标记物与检测抗体反应，对反应后的混合液进行透析，以获得标记抗体试剂，

清洗液配置步骤：配制清洗液，

磁微粒试剂制备步骤：使磁微粒活化后，加入抗肺炎支原体单克隆捕获抗体进行包被，随后进行磁性分离，以获得磁微粒试剂，