[发明专利]基于细胞的鉴定IDO1酶活性及筛选IDO1酶抑制剂的荧光检测方法

权利要求书

1.一种基于细胞的筛选IDO1酶抑制剂及鉴定IDO1酶活性的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提供重组表达IDO1的细胞，用DMEM培养基培养；

2)使步骤1)的培养基上清与色氨酸感受器接触；

3)测量步骤2)的混合物的荧光读数，其中在IDO1酶存在下与不加IFN-γ诱导的细胞相比改变的荧光读数指示IDO1酶活性，在IDO1酶和IDO1酶抑制剂存在下与IFN-γ诱导的细胞相比较，通过荧光读数的差异指示IDO1酶抑制剂的活性及IDO1酶活性。

2.根据权利要求1所述基于细胞的筛选IDO1酶抑制剂的荧光检测方法，其特征在于：步骤2)中所述色氨酸感受器是将摩尔比为1：1的葫芦脲8和甲基化氮杂苝胺溶解在水中形成的二元复合物体系；所述接触为涡旋2～3秒。

3.根据权利要求1所述的基于细胞的筛选IDO1酶抑制剂的荧光检测方法，其特征在于：步骤3)中所述荧光读数在激发波长为441nm、发射波长为510nm下检测荧光信号。

4.根据权利要求1所述的基于细胞的筛选IDO1酶抑制剂的荧光检测方法，其特征在于，所述步骤3)中所述通过荧光读数的差异指示IDO1酶抑制剂活性为：与IFN-γ诱导的细胞相比，在IFN-γ和目标化合物存在下荧光读数降低指示IDO1酶抑制剂的活性结果为IDO1酶抑制剂；

所述步骤3)中所述指示IDO1酶活性为：与未诱导的细胞相比，在IFN-γ存在下荧光读数升高指示IDO1酶抑制剂的活性结果为显示具有IDO1酶活性。

5.根据权利要求1所述的基于细胞的筛选IDO1酶抑制剂的荧光检测方法，其特征在于：所述IDO1酶是由IFN-γ诱导的IDO1酶；所述重组表达IDO1的细胞是HeLa或HepG2细胞，由IFN-γ刺激诱导表达。

6.一种基于细胞的鉴定IDO1酶活性的荧光检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)提供重组表达IDO1的细胞，用DMEM培养基培养；

2)步骤1)中的细胞洗涤后，用三元荧光体系孵育细胞，洗涤后用甲醛固定；

3)通过在IDO1酶存在下与不加IFN-γ诱导的细胞相比，比较荧光强度，指示IDO1酶活性。

7.根据权利要求6所述的基于细胞的鉴定IDO1酶活性的荧光检测方法，其特征在于：步骤2)所述的三元荧光体系为甲基化氮杂苝胺：葫芦脲：色氨酸的初始浓度的摩尔比为5：5：(0.1～1)的三元荧光体系，孵育细胞的时间为30分钟。

8.根据权利要求6所述的基于细胞的鉴定IDO1酶活性的荧光检测方法，其特征在于：步骤3)所述比较荧光强度，指示IDO1酶活性为通过激发波长均为488nm的荧光显微镜或流式细胞仪进行荧光比较，荧光显微镜结果为加入IFN-γ表达IDO1显示的细胞亮度高于不加IFN-γ诱导的细胞亮度，则表明IDO1酶活性高；流式细胞仪结果为加入IFN-γ表达IDO1显示的颗粒被染上的荧光数量高于不加IFN-γ诱导的IDO1的颗粒被染上的荧光数量，则表明IDO1酶活性高。

9.根据权利要求6所述的基于细胞的鉴定IDO1酶活性的荧光检测方法，其特征在于：所述IDO1酶是由IFN-γ诱导的IDO1酶；所述重组表达IDO1的细胞是HeLa或HepG2细胞，由IFN-γ刺激诱导表达。