[发明专利]一种修复石油烃污染土壤及地下水的功能菌群的制备方法

权利要求书

1.一种修复石油烃污染土壤及地下水的功能菌群的制备方法，其特征在于，包括：

菌源采样：以待修复石油烃污染土壤或地下水的土著微生物作为菌源；

功能菌群构建：将所述菌源接种到含有石油烃的培养液中进行菌群诱导驯化，构建原场地污染条件下的功能菌群；

混合发酵：将所述功能菌群接种到含有石油烃的发酵罐中进行混合发酵；

发酵后处理：收集发酵液中的菌体，并制备菌粉，得到用于修复石油烃污染土壤及地下水的功能菌群。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述功能菌群构建，包括：

配制培养液：所述培养液的配方为：基础无机盐培养基、待修复石油烃污染土壤的渗滤液或待修复石油烃污染地下水、无机载体、表面活性剂、自来水；将以上成分在布有曝气设施的培养容器中混合均匀；

接种：在所述培养液中添加原油、诱导底物并混合均匀，将所述菌源接入培养容器中；

菌群诱导驯化：对接种后的培养液进行曝气培养，得到含诱导驯化完成的培养液；

菌群构建：将诱导驯化完成的培养液静置，弃去培养液的部分上层清液，并补充预设量的新鲜培养液至培养容器中，继续培养，直至功能菌群构建完成。

3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，

在所述配制培养液过程中：所述培养液的配方为：0.1-1.2％w/v基础无机盐培养基、10-60％v/v待修复石油烃污染土壤的渗滤液或待修复石油烃污染地下水、0.2-2％w/v无机载体、0.02-0.2％w/v表面活性剂、余量为自来水；所述培养液体积为预计总培养体积的30-50％；

在所述接种过程中：在所述培养液中添加原油、诱导底物并混合均匀，使培养液中石油烃C6-C40浓度达到100-200mg/L、诱导底物浓度达到50-100mg/L，调节pH至6-8，将所述菌源接入培养容器中，使接种后的菌源浓度以污泥干质量计为3-12g/L；

在所述菌群诱导驯化过程中：对接种后的培养液进行曝气培养，控制DO：2-4mg/L，温度：15-37℃，每24h检测培养液石油烃含量；石油烃去除率达到90％以上后，补充原油、诱导底物，使培养液中石油烃浓度达到200-400mg/L，诱导底物浓度达到100-200mg/L；继续培养至石油烃去除率达到90％以上后，补充原油、诱导底物，使培养液中石油烃浓度达到400-800mg/L，诱导底物浓度达到200-400mg/L；继续培养至石油烃去除率达到90％以上后，即得到含诱导驯化完成的培养液；

在所述菌群构建过程中：将诱导驯化完成的培养液静置，弃去培养液体积10-50％的上层清液，并按所述培养液的配方配制新鲜培养液并补充到培养容器中，使培养液体积达到预计总体积，补充原油至石油烃浓度达到800-1600mg/L，继续培养；此后石油烃去除率每达到90％以上，将培养液静置，弃去培养液体积10-50％的上层清液，按所述培养液的配方配制新鲜培养液并补充到培养容器中，使培养液体积达到预计总体积，补充原油至石油烃浓度达到800-1600mg/L，继续培养；连续培养5-10个周期，功能菌群构建完成。

4.如权利要求2或3所述的制备方法，其特征在于，

按重量份计，所述基础无机盐培养基包括：氮源6-14份、磷源3-7份、CaCl₂0.6-1.4份、NaCl1.5-2.5份、MgSO₄0.6-1.4份、MnSO₄0.02-0.18份、FeSO₄0.02-0.18份；其中，所述氮源包括尿素、硫酸铵、硝酸铵、磷酸氢二铵、磷酸二氢铵中的一种或几种的组合；所述磷源包括磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、磷酸氢二铵、磷酸二氢铵、三聚磷酸钠、三聚磷酸钾中的一种或几种的组合；

所述无机载体包括沸石粉、硅藻土、活性炭、碳酸钙中的一种或几种的组合；

所述表面活性剂包括鼠李糖脂、槐糖脂、海藻糖脂中的一种或几种的组合；

所述诱导底物为甲苯和邻苯二酚，二者为任意比例的组合。