[发明专利]脐带间充质干细胞膜片及其制备方法

权利要求书

1.一种制备脐带间充质干细胞膜片的方法，包括：

在温敏培养皿表面包被一层基质；

将脐带间充质干细胞的细胞悬液加入温敏培养皿中进行培养；

降低温度，脐带间充质干细胞及其分泌的细胞外基质成片层状脱离，得到脐带间充质干细胞膜片。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述包被基质选自血清、胶原、明胶、纤连蛋白，玻连蛋白，层粘连蛋白，多聚鸟氨酸，多聚赖氨酸。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述包被基质浓度是30～100％(v/v)。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其中包被温度是20-40℃。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其中包被时间为0.5～48h。

6.根据权利要求1-5任一项所述的方法，其中包被比例不少于0.1ml FBS/cm²。

7.根据权利要求1-6任一项所述的方法，其中：

将脐带间充质干细胞的单细胞悬液以5×10⁵-2×10⁶个细胞/cm²的密度加入所述温敏培养皿中，培养约4～24h；或者，

将脐带间充质干细胞的单细胞悬液以1×10³-1×10⁶个细胞/cm²的密度加入所述温敏培养皿中，培养约24～168h。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其中所述细胞膜片未经分散剂处理而从培养皿剥离。

9.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其中所述细胞膜片未经刮擦处理而从培养皿剥离。

10.根据权利要求1-9任一项所述的方法，其中所述温敏培养皿表面涂覆了一层温度敏感性高分子物质，该高分子物质的亲疏水性能够随温度变化而变化。

11.通过权利要求1-10任一项的方法制备的脐带间充质干细胞膜片。

12.根据权利要求11所述的脐带间充质干细胞膜片，其基本上保留了脐带间充质干细胞分泌的所有细胞外基质。

13.根据权利要求11或12所述的脐带间充质干细胞膜片，其中所制备的脐带间充质干细胞膜片具备以下特征中的一项或多项：

(i)所述脐带间充质干细胞膜片内的细胞密度为约0.025×10⁶-25×10⁶；

(ii)所述脐带间充质干细胞膜片包含1-120层细胞；

(iii)所述脐带间充质干细胞膜片的厚度为约20-5000μm。

14.根据权利要求11-13任一项所述的脐带间充质干细胞膜片，其中所述脐带间充质干细胞膜片能够至少分泌IL-6、HGF和VEGF。

15.根据权利要求11-14任一项所述的脐带间充质干细胞膜片，其中所述脐带间充质干细胞膜片中的细胞外基质至少包含纤连蛋白(Fibronectin)、整联蛋白族、玻连蛋白。

16.一种分离培养脐带间充质干细胞的方法，其包括以下步骤：

(1)从脐带组织分离华通氏胶；

(2)将所述华通氏胶切碎以获得组织块；

(3)将所述组织块铺于培养容器中进行培养；

(4)加入适量的完全培养基覆盖组织块，并继续培养；

(5)当所述组织块周围出现附着于培养容器的细胞且所述细胞长至70～100％汇合时，移除所述组织块，并对细胞进行传代操作。