[发明专利]一种具有抗衰老活性牛大力多糖的制备方法

说明书

本发明公开了一种具有抗衰老活性牛大力多糖的制备方法，涉及天然产物多糖提取分离，旨在解决现有提取工艺牛大力多糖得率、纯度均较低的问题。所述制备方法包括以下步骤：牛大力粉末与水搅拌均匀后添加复合酶，将混合液超声处理，灭活复合酶，得酶解液；所述复合酶的组成为纤维素酶、木聚糖酶和中性蛋白酶；对酶解液进行超高压300～500MPa处理，得多糖溶液，醇沉，得多糖粗品；将多糖粗品溶解，加入十六烷基三甲基溴化铵，离心收集沉淀，再用氯化钠溶液溶解沉淀，加无水乙醇产生白色沉淀，收集沉淀；溶解沉淀得复溶溶液，将溶液进行脱盐处理；干燥，得高纯度的牛大力多糖。本发明的制备方法得到的牛大力多糖可用于制备抗衰老、抗氧化、增强免疫功能药物。

技术领域

本发明涉及天然产物多糖的提取与分离，更具体地说，涉及一种具有抗衰老活性牛大力多糖的制备方法。

背景技术

牛大力(Millettia Speciosa Champ.)为豆科蝶形花亚科崖豆藤属植物美丽崖豆藤的干燥块根，两广地区广泛种植，常用于药膳、药酒，具有润肺补虚、活络壮筋、止咳清肺之功效，为岭南地区著名的药食两用植物。牛大力含有香豆素、生物碱和糖类等有效成分，现代药理学研究证实牛大力具有抗氧化、抗炎、免疫调节、保肝等多种药理作用。牛大力已作为主要原料应用于强力健身胶囊等多种中成药的生产，临床用于治疗肺炎、慢性支气管炎、病后体虚、腰肌劳损等慢性疾病。

天然产物中多糖具有多种生物活性且毒副作用小等优点，如抗炎、增强免疫、抗氧化、降血糖等，越来越受到研究者的青睐。研究表明天然产物多糖具有抗氧化延缓衰老作用。衰老与氧化应激损伤导致的抗氧化能力减弱及细胞内活性氧簇水平增加关系密切，还与机体免疫功能下降有关。研究表明牛大力多糖由葡萄糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖和果糖等组成，具有体外抗氧化活性和抗脂质过氧化作用。牛大力多糖可减少脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1，发挥抗炎作用。牛大力多糖能延长小鼠爬杆时间，增加小鼠游泳耐力，降低血乳酸、尿素氮的含量、提高血中乳酸脱氢酶含量，具有一定的抗疲劳作用。牛大力多糖可显著增加抗体形成细胞数目，促进淋巴细胞转化，提升吞噬细胞的吞噬能力。综上所述，尽管针对牛大力多糖的药理作用研究已有部分报道，但绝大多数文献仅包括体外试验结果，且未见牛大力多糖抗衰老活性的相关研究。

目前，针对牛大力多糖提取及分离纯化的研究报道还较少。例如，除了采用传统的水提醇沉法以外，专利公开号CN109134685A的发明专利还公开了一种采用高压均质技术和微滤技术从牛大力中提取小分子量多糖的方法，可一定程度上提高纯度，但多糖得率得不到保证。文献《牛大力多糖酶法提取工艺优化及其抗氧化活性》报道单用纤维素酶酶解提取牛大力多糖成分，文献《双指标优化微波酶法辅助牛大力薯中多糖提取》使用微波辅助果胶酶提取牛大力薯中多糖。这些提取工艺获得的牛大力多糖得率均较低，且纯度还达不到药物或保健品添加剂的要求，因此，探讨一种牛大力多糖得率及纯度均较高的制备方法，对于开发牛大力这一珍贵中草药资源具有非常重要的意义。

发明内容

本发明的第一个目的在于提供一种具有抗衰老活性牛大力多糖的制备方法，该方法获得的多糖得率和纯度高，具有较高生物活性，工艺适合于大规模生产。

为实现本发明的第一个目的，提供如下的技术方案：一种具有抗衰老活性牛大力多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)超声波-复合酶前处理：牛大力粉末与水搅拌均匀后添加复合酶，将混合液超声处理，灭活复合酶，获得酶解液；所述复合酶的组成为纤维素酶、木聚糖酶和中性蛋白酶，其中，所述纤维素酶、木聚糖酶和中性蛋白酶的添加量依次为所述牛大力粉末质量的0.4～0.8％、0.2～0.6％、0.6～1.0％。

(2)超高压处理：对酶解液进行超高压300～500MPa处理，获得牛大力多糖溶液。

(3)醇沉，获得牛大力多糖粗品。