[发明专利]中华鳖微卫星标记、其引物及应用

说明书

本发明提供了一种中华鳖微卫星标记、其引物及应用，包括6个微卫星标记，分别为sp601、sp603、sp604、sp610、sp316、mitf；其中，sp601为SEQ ID NO.1所示的DNA序列或其互补序列；sp603为SEQ ID NO.2所示的DNA序列或其互补序列；sp604为SEQ ID NO.3所示的DNA序列或其互补序列；sp610为SEQ ID NO.4所示的DNA序列或其互补序列；sp316为SEQ ID NO.5所示的DNA序列或其互补序列；mitf为SEQ ID NO.6所示的DNA序列或其互补序列。发明提供的微卫星引物具有PCR扩增结果稳定、多态性高等特点，可用这些分子标记进行遗传多样性分析、群体遗传结构分析、遗传图谱的构建、基因定位、品种鉴定等，具有很好的应用价值。

技术领域

本发明涉及分子生物学DNA标记领域，具体涉及一种中华鳖微卫星标记、其引物及应用。

背景技术

生物遗传多样性的研究经历过形态学水平、细胞学水平、生化水平再到当今的分子水平。与前三者相比，分子水平遗传多样性标记优点在于：1)多态性丰富；2)数量大；3)不受外界环境等因素限制，同时也可在不同组织的不同发育阶段中检测到。

分子标记直接反映遗传变异形式，且所反映的遗传变异种类丰富，受环境影响较少，且分子标记检测有着良好的重复性。继形态学标记、细胞标记、生化标记和免疫学标记之后，得到了迅速发展。因此，被广泛应用在基因定位和遗传育种等方面。

微卫星标记技术(microsatellite)，又称为简单序列重复(Simple SequenceRepeats,SSR)，是以重复单位(1-6bp的核苷酸)首尾相连，均匀分布在整个生物基因组中^[19]。其原理是SSR位点两端侧翼序列保守性高，因微卫星本身基序和重复次数都不同，进行PCR扩增时形成微卫星位点多态性，可用于遗传学分析。微卫星标记的优点是基因组上SSR片段分布广泛、对模板质量要求低、共显性遗传；且较保守，容易检测。

中华鳖(Pelodiscus sinensis)隶属爬行纲(Reptilia)、龟鳖目(Testudinata)、鳖科(Trionychidae)、鳖属(Pelodiscus)，自然分布于中国、日本、越南北部、韩国、俄罗斯东部，也被引入泰国、马来西亚、美国夏威夷等地。在我国，除新疆、西藏和青海外其余各省均产中华鳖。由于其独特的食用价值和药用价值，成为我国重要的特种水产经济动物。目前我国中华鳖的养殖品系较多，不同品系的稚鳖形态差异不大，鳖卵更是难以区分，但不同品系的养殖特性差异较大，因此市面上经常出现以次充好的现象，造成严重的种质混杂，导致性状退化，此外人为引种导致病害频发，品质下降。因此，保护中华鳖种质的工作迫在眉睫，遗传多样性的评价在中华鳖种质的保护工作中占有重要地位。

发明内容

本发明的目的就是提供一种中华鳖微卫星标记、其引物及应用，以为中华鳖分子标记辅助育种提供有效的工具。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种中华鳖微卫星标记，包括6个微卫星标记，分别为sp601、sp603、sp604、sp610、sp316、mitf；其中，

sp601为SEQ ID NO.1所示的DNA序列或其互补序列，其微卫星重复序列为(CTTTTC)8；

sp603为SEQ ID NO.2所示的DNA序列或其互补序列，其微卫星重复序列为(TATCTC)7；

sp604为SEQ ID NO.3所示的DNA序列或其互补序列，其微卫星重复序列为(TTTCTT)9；

sp610为SEQ ID NO.4所示的DNA序列或其互补序列，其微卫星重复序列为(TTTCCT)10；

sp316为SEQ ID NO.5所示的DNA序列或其互补序列，其微卫星重复序列为(CTT)15；