[发明专利]一种均相化学发光分析的方法及其应用

说明书

本发明涉及一种均相化学发光分析方法及其应用。所述方法通过在待测样品中加入包含特定供体颗粒的供体试剂和/或包含特定受体颗粒的受体试剂，所述供体颗粒产生活性氧的效率高，活性氧在均相体系中更容易传递给受体颗粒，不易受其他物质的干扰，且所述供体颗粒本身的稳定性较高，在供体试剂中能够稳定存在，不容易失活；所述受体颗粒粒径分布变异系数C.V值≥5％，使得所述方法不仅检测灵敏度较高，而且检测量程宽。

技术领域

本发明属于化学发光分析领域，具体涉及一种均相化学发光分析方法及其应用。

背景技术

免疫分析经过半个多世纪的发展，已经发展出了很多种类。根据测定过程中是否要将待测物质与反应体系分离可以分为非均相(Heterogenous)免疫分析和均相(Homogeneous)免疫分析。非均相免疫分析，是指引入探针进行标记的操作过程中，各种相关试剂混合反应后需要进行分离，将待测物与反应体系分离后再进行检测，是现在免疫分析中的主流方法。如广为人们熟知的酶联免疫吸附法(ELISA法)和磁微粒化学发光法等。均相免疫分析则是指在测定过程中将待测物与反应体系中的相关试剂混合反应后直接测定，而没有多余的分离或清洗的步骤。截止目前，多种灵敏的检测方法被应用于均相免疫分析，比如光学检测方法、电化学检测方法等。

例如，光激化学发光检测(Light Initiated Chemiluminescent Assay，LiCA)就是一种典型的均相免疫分析方法。它是基于两种微球表面包被的抗原或抗体，在液相中形成免疫复合物而将两种微球拉近。在激光的激发下，发生微球之间的单线态氧的转移，进而产生高能级的红光，通过单光子计数器和数学拟合将光子数换算为靶分子浓度。而当样本不含靶分子时，两种微球间无法形成免疫复合物，两种微球的间距超出单线态氧传播范围，单线态氧在液相中迅速淬灭，检测时则无高能级红光信号产生。它具有快速、均相(免冲洗)、高灵敏和操作简单的特点。光激化学发光技术已经在很多检测项目上得到应用。

光激化学发光检测以“双球”为基本特征，“双球”指系统由“发光微球”和“感光微球”组成，且两种微球的在液相中有很好悬浮特性。微球在液相中和抗原或抗体相遇完全符合液态动力学特征。感光微球产生单线态氧的效率及时间、感光微球本身的稳定性、感光微球的生产成本、感光微球使用的便捷性均影响光激化学发光产品最终的检测结果。

随着检测行业的进步，对超敏试剂的需求越来越多，不但对灵敏度要求极高，而且检测量程又要求非常宽，现有的均相化学发光检测方法就很难满足上述检测条件。因此，亟需开发一种既能满足灵敏度要求、又能满足线性范围要求的均相化学发光分析方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种用于均相化学发光分析方法，利用该方法进行检测时，既有超高的灵敏度，又具有很宽的检测量程。

为此，本发明第一方面提供了一种均相化学发光分析方法，其包括如下步骤：

步骤S1，将待测样品与受体试剂相接触，反应后生成中间混合物；

步骤S2，将所述中间混合物与供体试剂相接触，反应后生成待测混合物；

步骤S3，利用能量或者活性化合物激发所述待测混合物化学发光，检测所述化学发光的信号强度；从而据此判断待测样品中是否含有待测目标分子和/或待测目标分子在待测样品的浓度；

其中，所述供体试剂包含能够在激发状态下生成活性氧的供体颗粒，所述供体颗粒包括第一载体，所述第一载体的内部填充有敏化剂，所述第一载体的表面化学键合特异性结合配对成员中的一员；

所述受体试剂包含能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号的受体颗粒；所述受体颗粒包括第二载体，所述第二载体的内部填充有发光组合物，所述第二载体的表面包被有至少一层多糖层，所述多糖层的表面连接有报告分子，所述报告分子能够与待测目标分子特异性结合。