[发明专利]一种骨髓间充质干细胞培养基及其应用

说明书

本发明提供了一种骨髓间充质干细胞培养基，属于干细胞及细胞体外培养扩增技术领域，所述培养基包括以下浓度的组分：Dulbecco改良MEM培养基体积百分含量52％～53％、MCDB培养基体积百分含量38％～42％、ITS细胞培养添加物1X、亚油酸8～12μg/mL、人血清白蛋白40～60μg/mL、青霉素和链霉素1X、左旋抗坏血酸75～125μM、胎牛血清体积百分含量1％～3％、地塞米松10～15μM、血小板源性生长因子12～18ng/mL和促生长因子8～12ng/mL。采用本发明的培养基培养后，骨髓间充质干细胞bMSC的克隆化培养成功率增加，传代次数增加，细胞纯度较高，细胞的原始性增加。

技术领域

本发明涉及干细胞及细胞体外培养扩增技术领域，尤其涉及一种骨髓间充质干细胞培养基及其应用。

背景技术

干细胞的临床治疗需要合适的种子细胞。目前研究较多的胚胎干细胞ESC，是最早被分离得到的多能干细胞，体外培养可保持稳定增殖能力，具有向多个胚层方向分化的潜能。但是胚胎干细胞一般是来自于异源性组织的细胞，有免疫排斥的风险。虽然已经有成体细胞核移植获得的ESC，可避免免疫排斥反应，但依然存在在体内有形成畸胎瘤的风险，并且ESC的伦理学争议较多。

自体组织中，骨髓中含有多中干细胞已被多次报道，且有多例临床报道骨髓干细胞移植可帮助治疗其他非造血系统疾病。同时，骨髓干细胞恶性转化仅有体外实验报道，体内实验尚未见恶性转化。骨髓中目前已经分离得到的干细胞包括HSC,bMSC，MAPC，MIAMI等，其中，MSC，MAPC，MIAMI等均具有向多个胚层方向分化的潜能。

但是，bMSC是来源于骨髓的间充质干细胞，其细胞成分复杂，自我更新能力较低，同时，bMSC体外增殖能力一般，其后续应用于临床细胞治疗也受到限制。综上所述：病人自体的骨髓中存在bMSC，且骨髓来源的bMSC体外可向三胚层方向分化，有巨大的临床应用潜能。所以有必要培养一种比较纯化的bMSC，并实现其在体外的长期扩增培养。

常规的骨髓间充质干细胞培养基配方为10％胎牛血清，1％青霉素链霉素双抗，低糖DMEM。用这种培养基培养骨髓间充质干细胞，一般传代到第5代，细胞会出现分化，衰老。因而，目前需要一种能够实现人骨髓间充质干细胞的体外长期扩增培养。

发明内容

本发明的目的在于提供一种骨髓间充质干细胞培养基及其应用，该培养基能够实现人骨髓间充质干细胞的体外长期扩增培养。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种骨髓间充质干细胞培养基，包括以下浓度的组分：Dulbecco改良MEM培养基体积百分含量52％～53％、MCDB培养基体积百分含量38％～42％、ITS细胞培养添加物1X、亚油酸8～12μg/mL、人血清白蛋白40～60μg/mL、青霉素和链霉素1X、左旋抗坏血酸75～125μM、胎牛血清体积百分含量1％～3％、地塞米松10～15μM、血小板源性生长因子12～18ng/mL和促生长因子8～12ng/mL。

优选的，所述骨髓间充质干细胞培养基，包括以下浓度的组分：体积百分含量为52.7％的Dulbecco改良MEM低糖培养基、体积百分含量为40％的MCDB培养基、ITS细胞培养添加物1X、亚油酸10μg/mL、人血清白蛋白50μg/mL、青霉素和链霉素1X、左旋抗坏血酸100uM、体积百分含量为2％的胎牛血清、地塞米松10μM、血小板源性生长因子15ng/mL和促生长因子10ng/mL。

本发明还提供了上述方案所述骨髓间充质干细胞培养基在间充质干细胞传代培养中的应用。

优选的，所述骨髓间充质干细胞包括人骨髓间充质干细胞。

优选的，所述应用包括以下步骤：将骨髓间充质干细胞接种于上述方案所述骨髓间充质干细胞培养基中进行培养，培养至骨髓间充质干细胞密度为70％～80％汇合时进行传代。