[发明专利]αs1

说明书

本发明公开了氨基酸序列为SEEIVPNSVEQKHIQKEDVPSER的α_s1‑酪蛋白的抗原表位，及其利用该抗原表位制备有效的单克隆抗体，进一步提供利用所述单克隆抗体作为一抗，通过间接竞争ELISA来检测α_s1‑酪蛋白或其水解物过敏原的方法。利用本发明的α_s1‑酪蛋白的抗原表位制备的单克隆抗体，通过间接竞争ELISA方法检测α_s1‑酪蛋白为抗原，其检出限低于为10.49ng/mL，且其检测方法精确性、重复性较好，能够有效的用于检测牛乳过敏原，具有推广应用价值。

技术领域

本发明涉及生物技术和食品领域，具体而言，涉及α_s1-酪蛋白的抗原表位，及其制备得到的单抗，并利用所述单抗检测牛乳过敏原的方法。

背景技术

牛乳是一种营养丰富的蛋白制品，同时也是常见的八大过敏物质(蛋类、鱼类、甲壳类、奶制品、花生、大豆、坚果、小麦)之一，其致敏性严重影响了婴幼儿的身体健康(MillsE N C,Valovirta E,Madsen C, et al.Information provision for allergicconsumers-where are we going with food allergen labelling？[J].Allergy, 2004,59(12):1262-1268)。牛乳蛋白含量丰富，每升牛乳含有约30-35克蛋白质，含有超过25种不同的蛋白质，理论而言其中的任何一种蛋白质都有潜在致敏性(Martorell-Aragonés A,Echeverría-Zudaire L, Alonso-Lebrero E,et al.Position document:IgE-mediatedcow's milk allergy[J].Allergologia et Immunopathologia,2015,43(5):507-526)。但目前普遍认为酪蛋白(casein，CN)、β-乳球蛋白 (beta-lactoglobulin，β-lg)及α-乳白蛋白(alpha-lactalbumin，α-la)是主要的牛乳过敏原 (Galan-Malo P,López M,Ortiz J,etal.Detection of egg and milk residues on working surfaces by ELISA andlateral flow immunoassay tests[J].Food Control,2017,74:45-53)。乳清蛋白占牛乳蛋白约20％，其中发现α- 乳清蛋白(Bosd4)，β-乳球蛋白(Bosd5)，免疫球蛋白(Bosd7)，牛血清白蛋白(BSA，Bosd6)和痕量的乳铁蛋白(Bosd lactoferrin)是过敏原。而α-乳白蛋白和β-乳球蛋白是乳清部分最重要的过敏原，占总乳蛋白的5％和10％(Hochwallner H,Schulmeister U,Swoboda I,et al.Cow’s milk allergy:From allergens to new formsof diagnosis,therapy and prevention[J].Methods,2014,66(1):22-33；Docena G H,Fernandez R,Chirdo F G,et al.Identification of casein as the major allergenicand antigenic protein of cow's milk[J].Allergy,1996,51(6):412-416)。酪蛋白大约占牛乳总蛋白的80％，有文献报道，大约65％的牛乳致敏者都对酪蛋白过敏(王蒙,张汆,贾小丽,等.食物中常见过敏原及其过敏特性[J]. 中国食物与营养,2008(11):62-64)。酪蛋白由α_s1-酪蛋白(32％)，α_s2-酪蛋白(10％)，β-酪蛋白(28％) 和κ-酪蛋白(10％)四种蛋白质组成，其中α_s1-酪蛋白是酪蛋白部分最重要的过敏原，占据牛乳总蛋白的30％以上(Schulmeister U,Hochwallner H,Swoboda I,et al.Cloning,Expression,and Mappingof Allergenic Determinants ofα_s1-Casein,a Major Cow's Milk Allergen[J].TheJournal of Immunology, 2009,182(11):7019-7029)。α_s1-酪蛋白是一条单链的磷酸化蛋白质，由199个氨基酸构成，脯氨酸含量较高，没有二硫键，三级结构比较简单(KumosinskiT F,Brown E M,Farrell H M.Three-Dimensional Molecular Modeling of BovineCaseins:α_s1-Casein[J].Journal of Dairy Science,1991,74(9):2889-2895)。完整的α_s1-酪蛋白或其较大的IgE反应片段是引起过敏反应的原因(Schulmeister U,HochwallnerH,Swoboda I,et al.Cloning, Expression,and Mapping of Allergenic Determinantsofα_s1-Casein,a Major Cow's Milk Allergen[J].The Journal of Immunology,2009,182(11):7019-7029)。