[发明专利]一种防治莴苣菌核病的生防制剂及其制备和使用方法

权利要求书

1.一种防治莴苣菌核病的生防制剂，其特征在于，包括以重量份计的以下成分：银杏内生真菌粉红螺旋聚孢霉发酵液15-35份、银杏叶提取物10-20份和银杏外种皮提取物15-25份；将粉红螺旋聚孢霉经固体培养和液体培养制备得到的发酵液、银杏叶提取物和银杏外种皮提取物按所述重量份混合即得到所述生防制剂。

2.根据权利要求1所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂，其特征在于，所述生防制剂包括以重量份计的以下成分：银杏内生真菌粉红螺旋聚孢霉发酵液25份、银杏叶提取物15份和银杏外种皮提取物20份。

3.根据权利要求1或2所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将活化培养后的粉红螺旋聚孢霉接种至PDA平板中央，放置在28℃恒温培养箱中培养2-3d，然后将经过纯化的粉红螺旋聚孢霉的菌饼接种至PDB液体培养基中，于恒温摇床上培养2-3d，得到所述粉红螺旋聚孢霉发酵液；

(2)将银杏叶干燥后粉碎过40-60目筛，再放入提取罐中，同时加入体积浓度为60-80％的乙醇提取2-3次，每次提取60-70min，合并提取液；将提取液减压蒸馏至原体积的1/5-1/10，得到浓缩液，向浓缩液中加入等体积的纯化水，沉淀12-15h，取上清液；将上清液减压干燥后上酸性氧化铝柱，用含乙酸的乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压蒸馏得到流浸膏，流浸膏减压干燥，得到所述银杏叶提取物；

(3)将银杏外种皮采用90-99℃热水煎煮，每次1-2h，共煎煮2-3次，料液比为1:6-12(W/V)，将煎煮液分别过滤，合并滤液减压浓缩，将浓缩液转移至容器中，将容器置于磁力搅拌器的基座上，将乙醇缓慢滴加入浓缩液中，使乙醇终浓度达到60-80％(V/V)，在加入乙醇的同时开动磁力搅拌器搅拌，静置后将沉淀物再用体积浓度为80-90％的乙醇洗涤3-5次后真空干燥，得到所述银杏外种皮提取物；

(4)将所述尖孢镰刀菌发酵液、所述银杏叶提取物和所述银杏外种皮提取物按重量份混合均匀即得所述生防制剂。

4.根据权利要求3所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中恒温摇床培养时的温度为28-30℃，转速为200-220r/min。

5.根据权利要求3所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)得到的粉红螺旋聚孢霉发酵液中粉红螺旋聚孢霉的菌体浓度≥1×10⁷cfu/ml。

6.根据权利要求3所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)提取罐中乙醇的用量为银杏叶重量的4-8倍。

7.根据权利要求3所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中含乙酸的乙醇为体积浓度为80-90％的乙醇和体积百分比0.1-0.5％的乙酸组成。

8.根据权利要求3所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中磁力搅拌器的搅拌温度为20-30℃，转速为1400-1800r/min。

9.根据权利要求1或2所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的使用方法，其特征在于，所述使用方法具体为：在莴苣种子播种后，按照每百粒种子10-20ml取所述生防制剂，用无菌水稀释10-20倍后浇施苗床。

10.根据权利要求1或2所述的一种防治莴苣菌核病的生防制剂的使用方法，其特征在于，所述使用方法具体为：在莴苣幼苗长出5-6片叶后，将所述生防制剂用无菌水稀释20-40倍，用喷雾器均匀喷洒在莴苣幼苗植株的叶片表面。