[发明专利]一种胶状溶杆菌发酵液的制备方法及应用

说明书

本发明公开一种胶状溶杆菌发酵液的制备方法及应用，将胶状溶杆菌接种到SDB培养基中，28℃～30℃恒温摇床内培养4天～5天，发酵液离心分离菌液和菌体，上清液在1～5℃保存备用，得到胶状溶杆菌的活性发酵液，胶状溶杆菌发酵液在制备毒杀南方根结线虫和秀丽隐杆线虫生物制剂中的应用，本发明具有制备方法简单，高效低毒的优点，发酵原液在24小时对秀丽隐杆线虫的致死率达到100％，在48小时对南方根结线虫的致死率也达到100％。

技术领域

本发明涉及一种胶状溶杆菌发酵液的制备方法及应用，属微生物生物农药 技术领域。

背景技术

植物病原线虫引起的病害是农业生产中的重要病害之一。长期以来，植物 病原线虫的防治主要依靠化学农药，其在保障农作物高产稳产中发挥了重要作 用；但由于化学农药高毒性，长期不合理使用以及过度依赖，造成农产品和环 境污染问题非常突出，部分化学杀线虫剂被禁用。因此，利用更加环保的资源 开发生物杀线虫剂的研究受到普遍关注。

发酵液是指将菌种接种与培养基培养一段时间的液体，细菌的发酵液具有 发酵周期短，容易制备，易处理等优点，一般是作为肥料使用。

胶状溶杆菌(Lysobacter gummosus)的发酵液在毒杀线虫活性中的应用， 经国内外文献检索，未见相关的公开报道。

发明内容

本发明提供一种胶状溶杆菌发酵液的制备方法，具体步骤如下：

在装有100～120mL SDB液体培养基的三角瓶中接种100～120μL胶状溶 杆菌(Lysobacter gummosus)，28℃～30℃恒温摇床内培养4天～5天，发酵液 离心分离菌液和菌体，吸取上清液放在1～5℃的冰箱中备用，得到胶状溶杆菌 (Lysobacter gummosus)的活性发酵液。

所述SDB培养基的制备方法：称取蛋白胨10.0～12.0g，葡萄糖15.0～ 20.0g，用去离子水溶解并定容至1L，调节pH到6.8～7.2，121℃灭菌20分钟， 得到SDB液体培养基。

所述离心分离是用高速离心机在8000～10000rpm下离心15～20min。

所述胶状溶杆菌(Lysobacter gummosus)已于2018年3月23日保藏在中 国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区 北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；保藏号：CGMCC No.15505。

本发明还提供胶状溶杆菌发酵液在制备毒杀南方根结线虫(Meloidogyneincognita)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)生物制剂中的应用，将 含有南方根结线虫(M.incognita)和秀丽隐杆线虫(C.elegans)的悬液分别 与胶状溶杆菌(Lysobacter gummosus)的活性发酵液混匀后，将培养皿室温放 置，在解剖镜下随机选择10个视野定时(12小时、24小时、48小时)进行观 察，计数死亡线虫数和总线虫数，每个测试样品设三个重复，并以未接种菌株 的空白SDB培养基为对照，得到测试样品对线虫的致死率，以致死率高低评 定样品对线虫的毒力。

本发明的有益效果：

本发明具有制备方法简单，高效低毒的优点，发酵原液在24小时对秀丽 隐杆线虫(C.elegans)的致死率达到100％，在48小时对南方根结线虫(M. incognita)的致死率也达到100％，能够在制备毒杀南方根结线虫(M.incognita) 和秀丽隐杆线虫(C.elegans)生物制剂中应用。

具体实施方式

下面用实施例来进一步详述本发明，但本发明的内容并不局限于此。

实施例1

一种胶状溶杆菌发酵液的制备方法，具体步骤如下：