[发明专利]一种乙型肝炎病毒检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种乙型肝炎病毒检测试剂盒，所述检测试剂盒包括SNP位点的两对上下游扩增引物及扩增模板提取试剂、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，第一轮扩增产物长于第二轮扩增产物且包含第二轮扩增产物，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板进行，其中第一轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：1～2所示，第二轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：3～4所示。本发明采用采用两轮扩增的方法对同一段片段进行重复扩增，高效准确地扩增待扩增片段并进行焦磷酸测序检测miR 196ACT基因的SNP位点，可以快速的给出结论，便于临床对乳腺原位癌的疗效预判，取样方便并且检测高效快速成本低，为患者减轻了经济及身体上的负担。

技术领域

本发明涉及一种乙型肝炎病毒检测试剂盒，属于检测试剂盒领域。

背景技术

据世界卫生组织(World Health Organization，WHO)报道，全球曾感染过乙肝病毒的人口超过20亿人，其中3.5-4亿人为慢性感染者。15％-40％的乙肝病毒慢性携带者病情将恶化，每年约有50-100万人口死于乙肝性肝硬化和肝细胞癌(hepatocellularcarcinoma，HCC)。感染HBV后表现为急性自限性或是进入慢性病程，慢性HBV感染是导致肝硬化和肝细胞癌的最主要原因。

我国是病毒性肝炎高流行区域，HBV携带者达1.3亿，其中慢性乙肝有2300万，在我国法定传染病中由乙肝病毒所致的死亡高居前列。我国乙肝疫苗计划免疫管理始于1992年；随后2002年政府对乙肝的防控高度重视，规定对新生儿免费接种，使中国人群中HBsAg携带率从1992年的9.75％降至2006年的7.2％，目前我国疫苗接种率达98％以上，有效阻止了乙肝病毒的母婴垂直传播。但免疫虽然有效，仍然不能完全阻断HBV的母婴传播。持续性乙肝病毒感染与多种因素相关，可能受病毒、免疫反应和基因多样性的影响。约63％-85％的乙肝疫苗接种效果能被遗传因素解释。乙肝疫苗作用效果与乙肝病毒变异相关，且受母亲的乙肝病毒载量和HBeAg滴度影响。研究表明microRNAs的表达水平和肝癌转移、肝硬化和乙肝病毒感染相关，肝癌中表达异常的miRNA己经发现的包括，miR-18、miR-21、miR-26、miR-29、miR-101、miR-122、miR-125a、miR-139a、miR-143、miR-195、miR-199a/b-3p、 miR-221、miR-222、miR-224和let-7a等，在细胞生长、发育的各个过程中进行上调和下调。近年来的研究表明miR196a基因多态性在中国变异率高，与肿瘤发生机制相关，在细胞中还参与炎症反应、抗病毒作用、间叶干细胞分化及免疫反应。meta分析报道mir196a2CT多态性和乙肝肝细胞癌的易感性显著相关，进行人种分层分析显示在亚洲人和高加索人中均检测到此关联。miR 196aCT可能影响肝癌细胞的增殖和凋亡，研究显示这与调节凋亡因子Caspase-3和影响同源基因HoxB8的表达相关。儿童是乙肝的易感和高发人群，但是目前还没有针对儿童乙肝感染和miR 196aCT相关检测的检测试剂盒。因此研究设计一款基于miR-196a的乙肝检测试剂盒，对于临床大范围筛查和疾控有一定的作用。

发明内容

针对现有技术存在的上述问题，本发明的目的是获得一种乙型肝炎病毒检测试剂盒。

为实现上述发明目的，本发明采用的乙型肝炎病毒检测试剂盒的技术方案如下：

所述检测试剂盒包括SNP位点的两对上下游扩增引物及扩增模板提取试剂、DNA聚合酶、dNTPs和缓冲液，第一轮扩增产物长于第二轮扩增产物且包含第二轮扩增产物，第二轮扩增以第一轮扩增产物为模板进行，其中第一轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：1～2所示，第二轮扩增引物如序列表SEQ ID NO：3～4所示。

本发明中由于待测序列的特殊性，设计了两轮反向引物序列相同的扩增试剂盒，该试剂盒特异性高且扩增结果准确，使用简单方便，为后续的测序工作奠定了良好的基础。