[发明专利]一种用于免疫共沉淀的缓冲液及其应用

说明书

本发明公开一种用于免疫共沉淀的缓冲液及其应用，所述用于免疫共沉淀的缓冲液包括Tris‑HCl、NaCl、NP‑40和PEG，其中，所述Tris‑HCl和NaCl在所述缓冲液中的摩尔浓度对应为10～50mM和100～150mM。本发明采用温和的NP‑40去污剂，同时采用有机聚合物PEG来影响蛋白周围的水环境以及蛋白质之间的相互作用，促进大分子聚集，帮助相互作用的蛋白质靠近并结合，并使蛋白质之间的相互作用变得特异，减少了非特异性反应，从而使免疫共沉淀试验得到的照片中条带清晰、单一、可靠，从而有助于对试验结果做出正确的判断，提高免疫共沉淀试验结果的准确性。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及分子生物学技术领域，具体涉及一种用于免疫共沉淀的缓冲液及其应用。

背景技术

人们在研究蛋白质的功能时经常需要将待检测的组织或细胞进行裂解或破碎，以便其中的蛋白质释放出来，从而可以获取一种或多种蛋白以研究其功能及属性。裂解组织或细胞时常用的方法之一就是使用裂解液。裂解液配方的不同会影响蛋白质的获取效果，包括能否最大限量地收获蛋白质，尤其是能否得到比较纯的某种蛋白质。因此，选择一种合适的细胞裂解液是非常重要的。

通过细胞裂解的方法获得细胞总蛋白之后，需要通过免疫沉淀反应获取某种目标蛋白，从而进一步研究该蛋白质的属性与功能。免疫沉淀反应通常使用针对目标蛋白的抗体及凝胶珠子，然后抗原抗体反应必须在同一种缓冲液中进行，此时缓冲液往往直接使用细胞裂解液。

此外，在需要研究两种蛋白之间有无相互作用时，其方法之一也是免疫共沉淀反应，该反应中除了使用抗体和凝胶珠子外，仍然需要使用缓冲液，这种缓冲液也可以使用细胞裂解液。

在进行免疫沉淀反应时如果需要得到较纯的目标蛋白，除了抗体需要具有特异性之外，更重要的是需要恰当的缓冲液，缓冲液的好坏直接决定了能否得到较纯的目标蛋白以及得到比较清晰的照片。在进行免疫共沉淀时，如果有好的缓冲液，才能让两个的确有相互作用的蛋白发生结合反应，并通过照片显现出来，从而得出正确结论。如果缓冲液选择不恰当，则一种蛋白可能与多种蛋白质发生非特异性反应，照片显现出来时就是有多个条带或者模糊不清，从而让研究者无法判断这两种蛋白质是否发生相互作用。

目前用于细胞裂解、免疫沉淀和免疫共沉淀的细胞裂解液或缓冲液有多种，有些是实验室自制的，举例说明如下：(1)RIPA缓冲液：50mM Tris-HCl、150mM NaCl、1％NP-40、0.1％SDS、0.5％脱氧胆酸钠和1mM EDTA，pH 8.0，其中的NP-40、SDS和脱氧胆酸钠都可以裂解细胞、溶解蛋白质；(2)1％SDS裂解液：50mM Tris-HCl、20％甘油和1％SDS，pH 8.0，其中的SDS可以裂解细胞、溶解蛋白质；(3)IP裂解缓冲液：50mM Tris-HCl、150mM NaCl和1％Triton X-100，pH 8.0，其中的Triton X-100可以裂解细胞、溶解蛋白质。上述几种细胞裂解液是实验室常见的，其中的SDS和Triton X-100试剂裂解细胞和溶解蛋白能力较强，但容易使蛋白质变性，一般不适合用于免疫沉淀和免疫共沉淀反应，只适合于获取细胞总蛋白并用于Western blot等实验；RIPA裂解液中去污剂NP-40较为温和，由它裂解细胞获得的细胞总蛋白可以用于免疫沉淀和免疫共沉淀反应，但是它对于某些蛋白的纯化及研究某些蛋白的相互作用效果较好，但对于另一些蛋白则效果较差，非特异性反应较多，照片中显示的条带较多，甚至模糊一大片，让研究者无法判断实验结果。

发明内容

本发明的主要目的是提出一种用于免疫共沉淀的缓冲液及其应用，旨在使免疫共沉淀试验得到的照片中条带清晰，从而提高试验结果的准确性。

为实现上述目的，本发明提出一种用于免疫共沉淀的缓冲液，包括Tris-HCl、NaCl、NP-40和PEG，其中，所述Tris-HCl和NaCl在所述缓冲液中的摩尔浓度对应为10～50mM和100～150mM。

可选地，所述PEG的分子量不低于6000KDa。