[发明专利]一种梨囊鞭菌发酵秸秆生产阿魏酸酯酶的新方法和应用

权利要求书

1.一种梨囊鞭菌（Piromycessp.）CY1 厌氧发酵秸秆生产阿魏酸酯酶的方法，其特征在于，所述的方法具体包括如下步骤：

（1）梨囊鞭菌（Piromycessp.）CY1纯培养物菌剂的制备

将梨囊鞭菌（Piromycessp.）CY1纯培养物菌液以10 % v/v接种量接种到液体基本培养基中，加入1% w/v干燥粉碎的小麦秸秆作为底物，同时加入复合抗生素传代培养，厌氧培养即得到高活力菌剂；

（2）厌氧发酵秸秆生产阿魏酸酯酶

吸取步骤（1）制备的菌剂，按10% v/v接种量接入以1% w/v秸秆为底物的液体基本培养基中，加入复合抗生素厌氧培养；

所述的梨囊鞭菌（Piromycessp.）CY1保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为：CGMCC No.18141。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的液体基本培养基配方为：酵母膏 1.0g，蛋白胨 1.0 g，NaHCO₃ 7.0 g，1.0 g/ L刃天青 1 mL，L-半胱氨酸盐1.7 g，晨饲前采集瘤胃液8000×g，4℃离心20 min后的上清 170 mL，盐溶液 I 165 mL，盐溶液 II 165 mL，蒸馏水定容至1000 mL。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述的盐溶液 I 包括 NaCl 6 g，(NH4)₂SO₄3 g，KH₂PO₄ 3 g，CaCl₂·2H₂O 0.4 g， MgSO₄·2H₂O 0.6 g，蒸馏水定容至1000 mL；所述的盐溶液 II 包括4 g K₂HPO₄，蒸馏水定容至1000 mL。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的复合抗生素为青霉素钠、硫酸链霉素和氯霉素；所述的青霉素钠和硫酸链霉素在厌氧培养基的终浓度分别为 1600 IU/mL和2000 IU/mL，所述的氯霉素在培养基终浓度为50 μg/mL。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤（2）中加入的底物为小麦秸秆、玉米秸秆和水稻秸秆的任一种。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤（2）中加入的底物为羊草。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的步骤（2）中加入秸秆底物后除氧，高温高压灭菌。