[发明专利]一种贝类高F值寡肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种贝类高F值寡肽的制备方法，包括以下步骤：将贝肉洗净后匀浆，然后进行酶解，获取上层酶解液。以树枝状聚合物制备分子印迹材料，吸附酶解液中的芳香族氨基酸，得到高F值寡肽溶液，采用冷冻干燥制备高F值寡肽粉末。本发明产品原料易得且廉价，制备方法简单，便于工业化生产，产品得率75%以上，F值50以上，可作为肝病病人的膳食来源成分。

技术领域

本发明涉及生物肽制备领域，具体涉及一种贝类高F值寡肽的制备方法。

背景技术

高F 值寡肽是蛋白酶作用于食物蛋白质后形成的一种低分子量生理活性肽,由支链氨基酸含量高和芳香族氨基酸含量低的特殊氨基酸组成。F 值（Fischer ratio），是支链氨基酸与芳香族氨基酸含量的摩尔数比值。一般认为，用于临床治疗肝性脑病的高F 值寡肽的F 值应大于20。

正常人的血液中F 值为3.0-3.5，而患有肝脏疾病病人的F 值只有1.0 或者更低。对于肝病患者来说，其血浆F 值可以反映出患者肝病的严重程度。高F 值寡肽可用于防止肝性脑病的发生或减缓其症状，同时又改善病人的营养状况。高F 值寡肽还具有提供能量、抗疲劳、改善手术后和卧床病人的蛋白营养状况、治疗苯丙酮尿症的作用，在医药与临床营养方面受到广泛关注。

酶解法制备的高F值寡肽混合液含有大量游离芳香族氨基酸，对寡肽液进行脱芳处理，才能提高寡肽的F值。目前常用的高F值化方法主要有吸附法和过滤分离法。国内高F值化处理主要采用活性炭吸附法，该方法成本低，非常适合工业化应用，但是活性炭对芳香族氨基酸的吸附不具有特异性，不仅可以脱除芳香族氨基酸，也会吸附包含支链氨基酸在内的其它氨基酸，难以达到理想的吸附效果，对F值的提升效果不理想且不稳定，对原料及酶解工艺要求较高。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，对吸附法脱芳处理进行了改进，制备了分子印迹聚合物作为芳香族氨基酸吸附剂，具体发明内容如下：

一种贝类高F值寡肽的制备方法，其步骤包括蛋白酶解、芳香族氨基酸专一吸附剂制备、芳香族氨基酸脱除，所述芳香族氨基酸专一吸附剂为分子印迹聚合物。

优选的，所述芳香族氨基酸脱除包括如下步骤：

向所述蛋白酶解后的产物中添加其1-5wt%分子印迹聚合物，10-20℃搅拌30-100min， 4000-10000r/min离心5-30min，收集上清液，获得高F值寡肽溶液。

优选的，所述分子印迹聚合物由树枝化聚酰胺-胺制备而成。

进一步，所述分子印迹聚合物，其制备方法包括如下步骤：

(1)0.5代树枝状聚酰胺-胺制备：以乙二胺为核，进行Michael加成反应，制备0.5代树枝状聚酰胺-胺；

(2)1代树枝状聚酰胺-胺制备：以0.5代树枝状聚酰胺-胺和乙二胺进行酰胺化缩合反应制备1代树枝状聚酰胺-胺；

(3)2代树枝状聚酰胺-胺制备：对步骤(2)获得的1代树枝状聚酰胺-胺重复进行步骤(2)中的Michael加成和步骤(2)中的酰胺化缩合反应，制备2代树枝状聚酰胺-胺；

(4)端双键树枝状聚合物的制备： 由2代树枝状聚酰胺-胺和丙烯酰氯进行胺解反应即得到端双键树枝状聚酰胺-胺;

(5)分子印迹聚合物合成：以芳香族氨基酸作为模板，与步骤(4)中获得的端双键树枝状聚酰胺-胺合成，即得分子印迹聚合物。