[发明专利]一种基于NGS分型用于法医学个体识别的SNP-DIP微单倍型域的复合扩增体系

权利要求书

1.一种用于法医学个体识别的SNP-DIP组成的微单倍型域的复合扩增检测体系，其特征在于18个SNP/DIP微单倍型区域的位点信息；18个区域两步PCR的体系配比和反应条件。

2.根据权利要求书1所述，所述体系中包含的18个区域的位点信息如下所示。

3.根据权利要求书1所述，研发的试剂中所包含的组分有ddH₂O、10×PCR buffer、50nMPrimer Mix、2.5mM dNTP、5U/µL Hot Start DNA聚合酶、100mM Mg²⁺和2µM barcode试剂。

4.根据权利要求1所述，研发的体系的操作步骤如下所示：（1）取待测样品，采用磁珠DNA提取试剂盒，提取样本DNA；（2）首先进行第一轮PCR：PCR体系为10µL，具体包括：3.1µLddH₂O、1µL 10×PCR buffer、2µL 50nM Primer Mix、0.8µL 2.5mM dNTP、0.1µL 5U/µL HotStart DNA 聚合酶、1µL 100mM Mg²⁺和2µL 样本DNA；PCR反应条件为：95℃变性15min；94℃变性30s，60℃退火10min，72℃延伸30s，共4个循环；然后94℃变性30s，60℃退火1min，72℃延伸30s，共15个循环；（3）然后再进行第二轮PCR：在进行PCR之前，需要对第一轮的PCR产物加入100µL ddH₂O进行稀释；取10µL稀释后的PCR产物加入到包含有3.5µL ddH₂O、1µL 10×PCR buffer、3.6µL 2µM barcode、0.8µL 2.5mM dNTP、0.1µL 5U/µL Hot Start DNA 聚合酶和1µL 100mM Mg²⁺的混合溶液中；PCR反应条件如下：95℃变性15min；94℃变性30s，60℃退火4min，72℃延伸30s，共5个循环；然后94℃变性30s，65℃退火1min，72℃延伸30s，共10个循环；（3）文库的纯化和定量：取第二轮PCR产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测，然后对目的片段进行切胶回收，采用天根DP214试剂盒对目的片段进行纯化处理；然后采用Agilent2100生物分析仪对文库进行定量；（4）上机测序及数据分析：将构建好的文库放置于illumina X-10测序平台上进行测序分析；对于获得的测序数据，首先采用Cutadapt软件去除接头序列，然后采用BWA软件将去除接头后的序列和人类参考基因组（GRCh38.p12）进行比对，通过GATK软件确定研究位点的基因分型。