[发明专利]表达可溶性PD-1的嵌合抗原受体CAR基因及应用

权利要求书

1.一种表达可溶性PD-1的嵌合抗原受体CAR基因，其特征在于，所述CAR基因包括依次顺序连接的抗原结合结构域基因、跨膜结构域基因、胞内结构域基因和可溶性PD-1基因，所述可溶性PD-1为PD-1的胞外段区域，

优选的，所述可溶性PD-1包括SEQ ID No.1所示的氨基酸序列，

更优选的，所述可溶性PD-1基因的序列如SEQ ID No.2中的第1264-1713位所示。

2.根据权利要求1所述的CAR基因，其特征在于：在所述胞内结构域基因和所述可溶性PD-1基因之间连接有第一信号肽基因，

优选的，所述第一信号肽为如下蛋白的信号肽：CD19、CD20、CD30、CD4、CD8a、CD28、CD137或其组合；

更优选的，所述第一信号肽为CD8a的信号肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，更优选的，其基因序列如SEQ ID No.2中的第1201-1263位所示。

3.根据权利要求2所述的CAR基因，其特征在于：在所述胞内结构域基因和所述第一信号肽基因之间连接有自剪切蛋白基因，优选的，所述自剪切蛋白选自T2A、P2A、E2A、F2A或其组合，更优选的，所述自剪切蛋白为T2A。

4.根据权利要求1-3中任一所述的CAR基因，其特征在于：所述抗原结合结构域能够与NKG2D配体特异性结合，优选的，所述抗原结合结构域为NKG2D受体胞外段，更优选的，所述抗原结合结构域基因的前端包括第二信号肽基因；

优选的，所述第二信号肽为如下蛋白的信号肽：CD19、CD20、CD30、CD4、CD8a、CD28、CD137或其组合；更优选的，所述第二信号肽为CD8a的信号肽，更优选的，其氨基酸序列如SEQ ID No.3所示，更优选的，其基因序列如SEQ ID No.2中的第1-63位所示；

所述跨膜结构域包括如下蛋白的跨膜区：CD3ε、CD4、CD8a、CD9、CD16、CD22、CD33、CD137、CTLA-4、PD-1、LAG-3或其组合，优选，CD8a；

所述胞内结构域包括共刺激信号分子和胞浆信号传导序列；优选的，所述共刺激信号分子选自如下蛋白的共刺激信号分子：OX40、CD28、CD30、CD40、CD70、CD134、4-1BB、PD1、Dap10、CDS、ICAM-1或其组合，更优选，4-1BB；优选的，所述胞浆信号传导序列包括源于CD3ζ的胞浆信号传导序列。

5.根据权利要求1-4中任一所述的CAR基因，其特征在于：所述表达可溶性PD-1的嵌合抗原受体CAR基因序列如SEQ ID No.2所示。

6.一种重组载体，其特征在于：所述重组载体含有权利要求1-5中任一所述的CAR基因，所述重组载体优选为慢病毒载体。

7.一种重组细胞或重组菌，其特征在于：所述重组细胞或所述重组菌中含有权利要求1-5中任一所述的CAR基因，或含有权利要求6所述重组载体，

优选的，所述重组细胞为免疫细胞，更优选的，所述重组细胞为CAR-T细胞。

8.权利要求1-5中任一所述的CAR基因、权利要求6所述的重组载体、或权利要求7所述的重组细胞或重组菌在制备肿瘤治疗产品中的应用。

9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于：所述肿瘤治疗产品为选择性杀伤肿瘤细胞杀伤效果提高的肿瘤治疗产品。

10.根据权利要求8或9所述的应用，其特征在于：所述肿瘤为实体瘤，优选，骨肉瘤U2OS、骨肉瘤MG-3、肾癌细胞786O，更优选，骨肉瘤U2OS。